Прямая проба Кумбса . С помощью этой пробы доказывают наличие фиксированных эритроцитами ребенка блокирующих антител. Положительная прямая проба свидетельствует о сенсибилизации и служит убедительным признаком гемолитической болезни новорожденного еще до появления других клинических признаков. Как исключение и только в очень тяжелых случаях прямая проба Кумбса может оказаться отрицательной в связи с уже наступившим, почти полным гемолизом сенсибилизированных эритроцитов.
Прямая проба Кумбса выполняется следующим образом: 5 капель крови, взятой из пятки ребенка, помещают в пробирку и добавляют 5 мл физиологического раствора. Хорошо размешивают и центрифигуриуют в течение 10 мин. Отделяют прозрачную жидкость над осадком эритроцитов. Затем снова добавляют 5 мл физиологического раствора, смешивают и центрифигурируют. После трехкратного смешивания с физиологическим раствором эритроциты хорошо промыты. После последнего отделения надосадочной жидкости эритроцитный осадок в количестве 0,1 мл смешивают с 0,9 мл физиологического раствора. Наносят 2-3 капли этой смеси на предметное стекло и добавляют одну каплю сыворотки Кумбса. Наличие агглютинации указывает на то, что реакция положительна, (положительная прямая проба Кумбса). Исследование следует проводить при комнатной температуре выше 16°, чтобы избежать действия Холодовых агглютининов.
Непрямая проба Кумбса служит доказательством наличия свободных антител в сыворотке матери и выполняется с сывороткой крови матери.
Гемолитическая болезнь у новорожденного при Rh-несовместимости проявляется обыкновенно после второй беременности. Первый ребенок рождается здоровым, второй с признаками слабо выраженной анемии и только после третьей беременности рождаются дети с явными признаками гемолитической болезни. Только у предварительно сенсибилизированных женщин еще при первой беременности может родиться ребенок с симптомами гемолитической болезни. В некоторых случаях иммунизация вызывает аборты и рождение мертвых детей. Для начала и тяжести заболевания имеют значение состояние плаценты и продолжительность воздействия материнских агглютининов на плод. При появлении агглютининов за 10-14 недель до родов у ребенка обычно наблюдаются субклинические формы. Раннее появление агглютининов, за 15-26 недель до родов, вызывает тяжелые формы заболевания. При всех формах заболевания основным процессом является гемолиз. Последствие реакции антиген - антитело - гемолиз, поражение печеночных и мозговых капилляров. В зависимости от того, какое поражение преобладает, наблюдаются и различные формы заболевания. Опасны и некоторые анафилактические явления. Они приводят к образованию гистаминоподобных субстанций, вызывающих тяжелейшие поражения печеночной клетки и особенно ганглионарных клеток базальных ядер, аммонового рога, продолговатого мозга и даже коры головного мозга. При поражении печеночных клеток к экстрагепатальной желтухе добавляется и гепатальная. Дети погибают при тяжелых явлениях ядерной желтухи. Если они выживают, остаются симптомы поражений нервной системы (нарушения со стороны экстрапирамидальной системы с хореоатетозными движениями, своеобразной танцующей походкой, принудительными движениями головы, иногда расстройство координации произвольных движений с частым падением, повышенным тонусом мышц, умственной отсталостью, т. е. с признаками так наз. encephalopathia posticteria infantum).
Гемолитические анемии , вызванные аутоиммунными телами, которые направлены против собственных эритроцитов, точно не выяснены. Однако предполагается, что какие-то факторы (например, вирус, ненормальный белок) так изменяют эритроциты, что организм воспринимает их уже «как нечто чуждое» и вступает с ними в борьбу с помощью антител. По другой теории, направленные против эритроцитов антитела возникают почти случайно в процессе образования ненормальных белковых тел плазмы при некоторых болезнях. Такие белковые тела, точно так же «случайно», могут дать реакции, которые можно использовать для постановки диагноза (например, вирусная пневмония, как известно, дает положительную реакцию Вассермана, положительную реакцию Пауль - Буннеля и реакцию холодовой агглютинации).
Имеются два главных типа аутоантител при гемолитических анемиях, а именно: тепловые антитела (реагируют при 37°) и холодовые антитела (реактивная способность которых усиливается по мере приближения температуры к нулю). Тепловые антитела встречаются чаще Холодовых. Dacie нашел, что тепловые гемолизины встречаются в 2 раза чаще, чем холодовые. Гемолизины и агглютинины не являются принципиально различными антителами: они различаются только характером их действия. Агглютинины агглютинируют эритроциты, а гемолизины делают их более подверженными сложному процессу гемолиза (комплемент!). Аутоантитела, фиксируясь на эритроцитах, образуют комплекс эритроцит - глобин. Этот комплекс выявляется с помощью антиглобиновой пробы Кумбса.
Проба Кумбса проводится с сывороткой Кумбса, для приготовления которой сенсибилизируют кролика сывороткой человека, против которой в сыворотке кролика образуются антитела. При действии такой сенсибилизированной сыворотки на эритроциты человека наступает их агглютинация, если рецепторы эритроцитов заняты блокирующими антителами. Так как эти блокирующие антитела происходят из сыворотки человека, они дают агглютинацию с сывороткой кролика, сенсибилизированной к плазме человека и содержащей преципитины. Эта реакция названа пробой Кумбса; для гемолитической анемии на почве аутоиммунных тел (Lo tit) она почти специфична (подробности см. у Maier).
В общем при гемолитических анемиях с первичным нарушением эритроцитов проба Кумбса отрицательна, а при приобретенных - положительна. Однако из этого правила имеются некоторые исключения: ложноположительная проба Кумбса найдена при кризах конституциональных гемолитических анемий, а в слабой степени - также иногда после спленэктомии, при ревматическом полиартрите, саркоидозе, после частых переливаний крови и при системной красной волчанке. Естественно, что при приобретенных гемолитических анемиях без образования аутоиммунных тел она отрицательна.
Гемолитические анемии
, вызванные аутоиммунными телами, можно подразделить на:
а) острые, подострые и хронические формы, а также на
б) идиопатические с неизвестной этиологией и в) симптоматические [вирусная пневмония (только холодовые агглютинины), хронический лимфатический лейкоз, ретикулосаркома, лимфосаркома, системная красная волчанка (преимущественно тепловые, реже холодовые агглютинины), сифилис (холодовые агглютинины), опухоли яичников (Miescher с сотрудниками)).
в) симптоматические [вирусная пневмония (только холодовые агглютинины), хронический лимфатический лейкоз, ретикулосаркома, лимфосаркома, системная красная волчанка (преимущественно тепловые, реже холодовые агглютинины), сифилис (холодовые агглютинины), опухоли яичников (Miescher с сотрудниками)).
Клиника гемолитических анемий , развивающихся под действием аутоиммунных тел, очень разнообразна, и вряд ли поэтому можно нарисовать их общую клиническую картину. Поражаются лица всех возрастов и обоих полов равномерно. Все же идиопатические формы как будто чаще наблюдаются у женщин (Sacks и Workman).
Клиническая картина идиопатической формы изменяется в зависимости от тяжести заболевания. В хронических случаях начало постепенно, болезнь тянется многие годы с частыми обострениями. Тяжесть анемии различна в зависимости от степени гемолиза. Наблюдаются падения гемоглобина до 10%, в других случаях гемоглобин длительно удерживается на 50-60%. Интенсивность ретикулоцитоза и желтушной окраски кожи и сыворотки соответствует степени гемолиза. Билирубин в моче находят очень редко, так как он не проходит через почки, но гемоглобинурия наблюдается. Селезенка в хронических случаях чаще увеличена и может даже достигать очень значительных размеров, в других же случаях она еще прощупывается. Печень редко когда не увеличена.
В крови в большинстве случаев наблюдается макроцитоз, в острых стадиях также много микроцитов, редко отсутствуют нормобластоз и полихромазия, лейкоцитоз может достигать 30 000, тромбоциты в норме. В некоторых случаях, однако, имеется выраженная тромбоцитопения. Evans объясняет эти случаи одновременным наличием антител против тромбоцитов, так что налицо имеются одновременно гемолитическая анемия и тромбоцитопения на почве действия аутоиммунных тел- синдром Эванса (Evans). Осмотическая резистентность слегка понижена, но не в такой степени и не так постоянно, как при конституциональной шаровидноклеточной анемии. Проба на устойчивость к нагреванию (Hegglin- Maier) после 6 часов также может дать незначительный гемолиз (собственное наблюдение), но меньшей степени, чем лри анемии Маркиафава. В моче находят также гемосидерин (собственное наблюдение).
Прямая проба Кумбса (прямой антиглобулиновый тест) - это лабораторный тест, который выявляет антиэритроцитарные антитела, фиксированные на эритроцитах.
Показания к исследованию
Какие показания к исследованию: установление иммунной природы гемолитической анемии.
Подготовка к исследованию
Как подготовиться к исследованию:
1. Если пациент — новорожденный, родителям следует объяснить, что исследование поможет диагностировать ГБН (гемолитическую болезнь новорожденных).
2. Если у пациента подозревают гемолитическую анемию, ему следует объяснить, что исследование позволит выяснить, обусловлена ли она иммунными нарушениями, приемом препаратов или другими причинами.
3. Каких-либо ограничений в диете или режиме питания не требуется.
4. Следует предупредить пациента (или родителей новорожденного), что для исследования понадобится взять кровь из вены, и сообщить ему, кто и когда будет делать венепункцию.
5. Следует предупредить о возможности неприятных ощущений во время наложения жгута на руку и венепункции.
6. Препараты, которые могут повлиять на результат пробы, следует отменить. К ним относятся хинидин, метилдофа, цефалоспорины, сульфаниламиды, хлорпромазин, дифенилгидантоин, этосуксимид, гидралазин, леводопа, мефенаминовая кислота, мелфалан, пенициллин, прокаинамид, рифампин, стрептомицин, тетрациклины, изониазид.
Забор крови осуществляют в утренние часы натощак.
Материал для анализа
Материал для анализа:
Проведение процедуры
Как проходит процедура забора крови:
1. При проведении пробы у взрослого пациента после венепункции набирают кровь в пробирки с ЭДТА.
2. У новорожденных берут кровь из пуповины в пробирку с ЭДТА.
3. Место венепункции придавливают ватным шариком до остановки кровотечения.
4. При образовании гематомы в месте венепункции назначают согревающие компрессы.
5. После взятия крови пациент может возобновить прием отмененных препаратов.
6. Следует предупредить родителей новорожденного, что для контроля за динамикой анемии, возможно, потребуется повторное исследование.
Метод проведения прямой пробы Кумбса:
Она проводится следующим образом:
Для получения антител к человеческим иммуноглобулинам (антиглобулиновой сыворотки) или комплементу (антикомплементарной сыворотки) животное иммунизируют человеческой сывороткой, иммуноглобулинами или комплементом человека. Полученную от животного сыворотку очищают от антител к другим белкам.
Эритроциты больного отмывают физиологическим раствором для полного удаления сыворотки, которая нейтрализует антитела к иммуноглобулинам и комплементу и может стать причиной ложноотрицательного результата.
Если на поверхности эритроцитов фиксированы антитела или компоненты комплемента, добавление антиглобулиновой или антикомплементарной сыворотки вызывает агглютинацию эритроцитов.
Преимущества и недостатки
Какие преимущества и недостатки прямой пробы Кумбса:
Преимущества исследования: высокая чувствительность, значительно превосходящая разрешающую способность альтернативных методов исследования, которые используются для выявления неагглютинирующих антител.
Недостатки исследования:
Прямая проба Кумбса - трудоемкий метод исследования, требующий особой тщательности в выполнении. При ее использовании встречаются некоторые затруднения, связанные, в частности, с интерпретацией слабоположительных реакций. Известно, что ложные слабоположительные или отрицательные реакции при выполнении проб Кумбса могут быть следствием недостаточно эффективной отмывки эритроцитов, нейтрализации антиглобулинового реагента следами сыворотки, а также контакта с необезжиренной поверхностью, на которой может фиксироваться антиглобулин, теряя при этом свою активность.
Еще один недостаток пробы Кумбса — нестойкость антиглобулинового реагента, получение и хранение которого имеют определенные особенности, что также делает затруднительной количественную оценку реакции гемагглютинации с антиглобулиновой сывороткой.
Факторы, влияющие на результат исследования
Какие факторы могут повлиять на результат исследования:
1. Гемолиз, обусловленный неосторожным обращением с пробой крови.
2. Ацетаминофен, p-салициловая кислота, аминопирин, антигистаминные препараты, карбромал, цефалоспорины, хлорированные углеводные инсектициды, хлорпромазин, хлорпропрамид, цисплатин, клонидин, дипирон, этосуксимид, фенфлюрамин, фуадин, гидралазин, гидрохлортиазид, ибупрофен, инсулин, изониазид, леводофа, мефенаминовая кислота, мелфалан, метадон, метилдофа, метилсергид, номифензин, пеницилламин, пенициллины, фенацетин, фенилбутазон, пробенецид, прокаинамид, хинидин, хинин, рифампин, стрептомицин, сульфонамиды, производные сульфонилмочевины, тетрациклин, триамтерен, тримеллитиновый ангидрид.
На тарелку или предметное стекло наносятся пипетками (разными!) по 1-й крупной капле сыворотки О(I), А(II), В(III). Заметив время, чистой стеклянной палочкой или чистым углом предметного стекла капли сывороток соединяются с каплями крови. Определение длится 5 минут, покачивая тарелку, затем к каждой смеси капель добавляют по 1-й капле физраствора и оценивают результаты. Лучше, если сыворотка будет 2-х различных серий. Результаты групп крови должны совпадать в обеих сериях сыворотки.
Оценка результатов изогемагглютинации:
если все 3 сыворотки дали отрицательную реакцию, то есть смесь равномерно окрашена в розовый цвет - это О(I) группа крови;
если отрицательную реакцию дала только сыворотка группы А(II), а сыворотки О(I) и В(III) дали положительную реакцию, то есть появились зерна - это А(II) группа крови;
сыворотка группы В(II) дала отрицательную реакцию, а сыворотки группы О(I) и А(II) дали положительную - это В(III) группа крови.
изогемагглютинация. При положительной реакции в смеси появляются мельчайшие красные зернышки склеивающихся эритроцитов. Зернышки сливаются в более крупные зерна, а последние в хлопья. Сыворотка почти обесцвечивается;
при отрицательной реакции смесь в течение 5 мин остается равномерно окрашенной в розовый цвет и никаких зернышек не обнаруживается;
при работе с 3-я сыворотками групп О(I), А(II), В(III) возможны 4 комбинации реакций:
все 3 сыворотки дали положительные реакции - испытуемая кровь АВ(IV) группы. В этом случае проводится исследование с сывороткой АВ(IV) группы.
Обратите внимание! Капли исследуемой крови должны быть в 5-10 раз меньше капель сыворотки.
Ошибки изогемагглютинации.
Невыполнение агглютинации, где она должна быть и наличие агглютинации, где ее быть не должно. Это может быть при слабом титре сыворотки плюс плохая агглютинация эритроцитов.
Наличие агглютинации, где ее быть не должно - это псевдоагглютинация, когда кучки эритроцитов образуют "монетные столбики". Покачивание тарелки или добавление физраствора их разрушают.
Панагглютинация, когда сыворотка склеивает все эритроциты, в то числе и своей группы крови. К 5-й минуте признаки агглютинации исчезают.
Имеется еще так называемая холодовая панагглютинация, когда склеивание эритроцитов происходит из-за низкой температуры воздуха (ниже 15 °С) в помещении.
Во всех этих случаях проводят либо повторную реакцию, либо по стандартным эритроцитам.
Определение резус-принадлежности крови
Для определения резус-принадлежности, т. е. выявления в крови людей наличия или отсутствия антигенов системы резус используют стандартные сыворотки (реагенты) анти-резус, различные по специфичности, т. е. содержащие антитела по отношению к различным антигенам этой системы. Для определения антигена Rh 0 (D) чаще всего применяют сыворотку антирезус с добавлением 10% раствора желатина или используют стандартный реагент анти-резус, приготовленный заранее с 33% раствором полиглюкина. Для получения более точных результатов исследования, а также для выявления антигенов других серологических систем используют пробу Кумбса (она очень чувствительна также при определении совместимости переливаемой крови). Для исследования используют кровь нативную или приготовленную с каким-либо консервантом. В этом случае кровь следует отмывать от консерванта десятикратным объемом изотонического раствора хлорида натрия.При определении резус-принадлежности - Rh 0 (D) следует применять два образца сыворотки или реагента анти-резус двух различных серий и одновременно использовать для контроля стандартные эритроциты, полученные из крови от резус-положительных (Rh +) и резус-отрицательных (Rh -) лиц. При определении других изоантигенов должны соответственно применяться контрольные эритроциты, в которых содержится или отсутствует тот антиген, против которого направлены антитела в стандартной сыворотке.
Неполные тепловые агглютинины являются наиболее частой разновидностью антител, способных вызывать развитие аутоиммунных гемолитических анемий. Эти антитела относятся к IgG, редко - к IgM, IgA.
ПРОБА КУМБСА
Проба Кумбса: введение. Проба Кумбса - метод лабораторной диагностики, основанный на реакции гемагглютинации.
Основной метод диагностики аутоиммунных гемолитических анемий - проба Кумбса. В основе ее лежит способность антител, специфичных к иммуноглобулинам (особенно к IgG) или компонентам комплемента (особенно СЗ), агглютинировать эритроциты, покрытые IgG или СЗ.
Связывание IgG и СЗЬ с эритроцитами наблюдается при аутоиммунной гемолитической анемии и лекарственной иммунной гемолитической анемии. Прямая проба Кумбса. Прямая проба Кумбса применяется для выявления антител или компонентов комплемента, фиксированных на поверхности эритроцитов. Она проводится следующим образом:
Для получения антител к человеческим иммуноглобулинам (антиглобулиновой сыворотки) или комплементу (антикомплементарной сыворотки) животное иммунизируют человеческой сывороткой, иммуноглобулинами или комплементом человека. Полученную от животного сыворотку очищают от антител к другим белкам.
Эритроциты больного отмывают физиологическим раствором для полного удаления сыворотки, которая нейтрализует антитела к иммуноглобулинам и комплементу и может стать причиной ложноотрицательного результата.
Если на поверхности эритроцитов фиксированы антитела или компоненты комплемента, добавление антиглобулиновой или антикомплементарной сыворотки вызывает агглютинацию эритроцитов.
Прямую пробу Кумбса применяют в следующих случаях:
Аутоиммунный гемолиз.
Гемолитическая болезнь новорожденных.
Лекарственная иммунная гемолитическая анемия.
Гемолитические трансфузионные реакции. Непрямая проба Кумбса. Непрямая проба Кумбса позволяет обнаружить антитела к эритроцитам в сыворотке. Для этого сыворотку больного инкубируют с донорскими эритроцитами группы 0, а затем проводят прямую пробу Кумбса.
Непрямую пробу Кумбса применяют в следующих случаях:
Определение индивидуальной совместимости крови донора и реципиента.
Выявление аллоантител, включая антитела, вызывающие гемолитические трансфузионные реакции.
Определение поверхностных эритроцитарных антигенов в медицинской генетике и судебной медицине.
Подтверждение однояйцовости близнецов при трансплантации костного мозга.
Для проведения биологической пробы кровь начинают переливать по возможности быстро (желательно струйно). После переливания 25 мл крови трубка системы пережимается зажимом. Затем делается пауза на 3 мин, во время которой ведется наблюдение за состоянием реципиента. Для постановки биологической пробы кровь по 25 мл вводится трижды. По окончании пробы (после переливания первых 75 мл крови дробными дозами по 25 мл с интервалами 3 мин) система регулируется на необходимую скорость переливания. При переливании больному более одного флакона крови необходимости извлекать иглу из вены. В этом случае из пробирки флакона, в котором кончилась кровь, игла извлекается и вводится в следующий флакон. Трубка системы (резиновая или пластмассовая) пережимается в этот момент зажимом. Если во время переливания крови возникает необходимость внутривенного введения реципиенту какого-либо другого препарата, это осуществляют путем прокалывания резиновой трубки системы. Проколы пластикатовой трубки недопустимы, так как они не спадаются. После каждой гемотрансфузии за больным необходимо наблюдение для выявления и своевременного устранения возможных осложнений, в том числе аллергических реакций. Через 2 часа после окончания гемотрансфузии следует измерить температуру тела. При повышении ее измерение необходимо повторять в последующие 4 часа через каждый час. Не меньшее значение имеет наблюдение за мочеотделением и составом мочи, которое дает возможность установить наличие токсической посттрансфузионной реакции. Наступление олигурии и анурии после переливания крови, наличие в моче форменных элементов крови и белка являются прямым указанием на развитие посттрансфузионного гемолиза.
Тест Кумбса
Тест Кумбса – антиглобулиновая проба, направленная на выявление в резус-отрицательной крови неполных антиэритроцитарных антител к резус-фактору – специфическому белку, который находится на поверхности эритроцитов резус-положительной крови. Существует два вида данного теста: прямой – выявление антител на поверхности эритроцитов, непрямой – выявление антител в сыворотке крови. Прямая проба осуществляется при диагностике и мониторинге лечения заболеваний крови: гемолитической анемии, гемолитической болезни новорожденных и других. Непрямая проба выполняется для оценки совместимости крови донора и реципиента при переливании, а также для определения наличия и риска резус-конфликта при планировании и ведении беременности. Материалом для теста Кумбса является венозная кровь, исследование проводится методами на основе реакции агглютинации. В норме обе пробы дают отрицательный результат. Анализ выполняется в течение одного дня.
Тест Кумбса – клиническое исследование резус-отрицательной крови, направленное на обнаружение антител к резус-фактору. Проба используется для выявления риска развития резус-конфликта и гемолитических реакций. У каждого человека поверхность эритроцитов содержит определенный набор антигенов или агглютиногенов – соединений различной природы, по наличию или отсутствию которых судят о группе крови и резус-факторе. Существует множество видов антигенов, в медицинской практике наибольшее практическое значение имеют агглютиногены A и B, определяющие группу крови, и агглютиноген D – резус-фактор. При положительном резус-факторе на внешней мембране эритроцитов определяются антигены D, при отрицательном – нет.
Тест Кумбса, который также называют антиглобулиновой пробой, направлен на выявление в крови неполных антиэритроцитарных антител к системе резус-фактора. Антитела к резус-фактору – специфические иммуноглобулины, которые вырабатываются в резус-отрицательной крови при попадании в нее эритроцитов с агглютиногенами D. Это может произойти при смешении крови плода и беременной, при гемотрансфузиях, проведенных без предварительного типирования крови. Тест Кумбса существует в двух вариантах – прямой и непрямой. При выполнении прямого теста Кумбса выявляются антитела, закрепленные на поверхности эритроцитов. Исследование используется для установления причины гемолитической реакции. Непрямой тест Кумбса направлен на выявление антиэритроцитарных антител в плазме крови. Он необходим для определения совместимости крови донора и реципиента или матери и плода, позволяет предупредить развитие резус-конфликта и последующего гемолиза эритроцитов.
Кровь для проведения обоих вариантов теста Кумбса берется из вены. Анализ выполняется методом агглютинации с использованием антиглобулиновой сыворотки. Результаты исследования находят применение в гематологии при выявлении причин гемолитических реакций, в хирургии и реаниматологии при проведении гемотрансфузий, в акушерстве и гинекологии при мониторинге беременностей у женщин с резус-отрицательной кровью.
Показания
Прямой тест Кумбса, выявляющий антитела, закрепленные на поверхности эритроцитов, назначается при гемолитических реакциях (разрушении эритроцитов) различного происхождения. Исследование показано при первичной аутоиммунной гемолитической анемии, посттрансфузионной гемолитической анемии, гемолитической болезни новорожденного, гемолизе эритроцитов, вызванном аутоиммунными, опухолевыми или инфекционными заболеваниями, а также приемом лекарственных средств, например, хинидина, метилдопы, прокаинамида. Непрямой тест Кумбса, определяющий антитела в плазме крови, используется для предупреждения развития резус-конфликта. Он показан пациентам при подготовке к гемотрансфузиям, а также беременным с отрицательным резус-фактором при условии, что будущий отец ребенка имеет положительный резус-фактор.
С целью определения резус-совместимости тест Кумбса не назначается пациентам с резус-положительной кровью. В этих случаях на поверхности эритроцитов уже имеются антигены, выработка антител не может быть спровоцирована гемотрансфузией или попаданием крови плода в кровоток беременной. Также исследование не показано беременным женщинам, если оба родителя имеют отрицательный резус-фактор – передающийся по наследству рецессивный признак. Ребенок в таких парах всегда имеет резус-отрицательную кровь, иммунологический конфликт с матерью невозможен. При гемолитических патологиях антиглобулиновая проба не используется с целью контроля успешности терапии, так как результаты не отражают активность процесса разрушения эритроцитов.
Ограничением теста Кумбса является трудоемкость процедуры исследования – для получения достоверных результатов необходимо соблюдение температурных и временных режимов, правил подготовки реагентов и биоматериала. К преимуществам теста Кумбса относится его высокая чувствительность. При гемолитической анемии результаты этого анализа остаются положительными, даже если показатели гемоглобина, билирубина и ретикулоцитов нормализуются.
Подготовка к анализу и забор материала
Материалом для выполнения теста Кумбса является венозная кровь. Специальных требований ко времени проведения процедуры забора крови и к подготовке пациента нет. Как и при любом исследовании рекомендуется выдержать перерыв после приема пищи не менее 4 часов, а в последние 30 минут отказаться от курения, физических нагрузок, избегать эмоционального напряжения. Также стоит заранее обсудить с врачом необходимость отмены принимаемых лекарств – некоторые препараты могут исказить результаты теста Кумбса. Кровь берут с помощью шприца из локтевой вены, реже из вены на тыльной стороне кисти. В течение нескольких часов материал доставляется в лабораторию.
При выполнении прямого теста Кумбса к сыворотке крови пациента добавляется антиглобулиновая сыворотка. Через некоторое время смесь исследуется на наличие агглютинатов – они образуются, если на эритроцитах есть антитела. При положительном результате определяется агглютинирующий титр. Непрямой тест Кумбса состоит из большего количества этапов. Сначала антитела, находящиеся в сыворотке, в ходе инкубации фиксируются на введенных эритроцитах. Затем к образцу добавляется антиглобулиновая сыворотка, через некоторое время определяется наличие и титр агглютинатов. Сроки выполнения анализа – 1 день.
Нормальные результаты
В норме результат прямой теста Кумбса отрицательный (-). Это означает, что в крови нет антител, связанных с эритроцитами, и они не могут быть причиной гемолиза. Нормальный результат непрямого теста Кумбса тоже отрицательный (-), то есть антитела к резус-фактору в плазме крови отсутствуют. При подготовке к гемотрансфузии для реципиента это означает совместимость с кровью донора, при мониторинге беременности – отсутствие резус-сенсибилизации матери, низкий риск развития иммунологического конфликта. Физиологические факторы, такие как особенности питания или физической активности, не могут повлиять на результат пробы. Поэтому если результат положительный, необходима консультация врача.
Диагностическое значение анализа
Положительный результат теста Кумбса выражается качественно, от (+) до (++++), либо количественно, титрами от 1:16 до 1:256. Определение концентрации антител на эритроцитах и в сыворотке крови выполняется в обоих видах пробы. При положительном результате прямого теста Кумбса на внешней мембране эритроцитов выявляются антитела, которые приводят к разрушению этих клеток крови. Причиной может стать переливание крови без предварительного типирования – посттрансфузионная гемолитическая реакция, а также эритробластоз новорожденного, гемолитическая реакция вследствие применения лекарств, первичная или вторичная аутоиммунная гемолитическая анемия. Вторичное разрушение эритроцитов может быть вызвано системной красной волчанкой, синдромом Эванса, макроглобулинемией Вальденстрема, пароксизмальной холодовой гемоглобинурией, хроническим лимфолейкозом, лимфомой, инфекционным мононуклеозом, сифилисом, микоплазменной пневмонией.
Положительный результат непрямого теста Кумбса указывает на наличие в плазме антител к резус-фактору. На практике это означает, что произошла резус-сенсибилизация, существует возможность развития резус-конфликта после вливания крови донора, во время беременности. Для предупреждения осложнений беременности женщины с положительным результатом теста Кумбса ставятся на специальный учет.
Лечение отклонений от нормы
Тест Кумбса относится к изосерологическим исследованиям. Его результаты позволяют выявить гемолитическую реакцию, а также определить совместимость крови донора и реципиента, матери и плода, чтобы предупредить развитие резус-конфликта. Если результат пробы положительный, то необходимо обратиться за консультацией к лечащему врачу – акушеру-гинекологу, гематологу, хирургу.