Окрашивание срезов в гистологии для обзорных целей
Различают методы окраски для обзорных целей, применяемые для получения общего представления о морфологии ткани или органа, и специальные, предназначенные для выявления определенных элементов клетки или ткани (например, комплекса Гольджи, митохондрий, эластических волокон соединительной ткани и т. д.).
Ниже рассматриваются лишь некоторые методы окрашивания для обзорных целей.
Суть их обычно заключается в том, что при этом окрашиваются ядра и каким-то контрастным красителем- цитоплазма.
Ядерные (основные) красители. для окрашивания ядер используются гематоксилин, кармин, сафранин и другие основные красители. Существует несколько способов приготовления растворов гематоксилина.
Наиболее распространенным является гематоксилин Эрлиха.
Гематоксилин Эрлиха.
Для его приготовления 2,0 г гематоксилина растворяют в 100 мл 96% спирта и к полученному раствору добавляют 100 мл дистиллированной воды, 100 мл глицерина, 3,0 г калийных квасцов и 10 мл ледяной уксусной кислоты. Все ингредиенты нужно добавлять в указанной последовательности. Полученный раствор необходимо поставить на свету и при доступе воздуха не менее чем на 15 дней с тем, чтобы гематоксилин успел окислиться в гематеин, который и является красящим веществом. Банку с раствором при этом накрывают бумажным колпачком или сложенной в несколько раз марлей. Гематоксилин Эрлиха окрашивает ядра в синий цвет. Его используют при окрашивании срезов гематоксилин-эозином.
Железный гематоксилин Гейденгайна
окрашивает в черный цвет не только ядра, но и митохондрии, темные диски скелетной и сердечной мышечной ткани и другие структуры. для его приготовления 1 г гематоксилина растворяют в 10 мл 96% спирта, добавляют 90 мл дистиллированной воды и оставляют созревать на срок не менее 4 нед. Перед окрашиванием срезы протравливают в течение 2-12 ч в 2,5% растворе железоаммиачных квасцов. Раствор квасцов получают за счет 4-кратного разведения исходного 10% раствора, для приготовления которого используются кристаллы квасцов только фиолетового цвета. После промывания в дистиллированной воде срезы окрашивают в течение 1-36 ч раствором гематоксилина, разведенным вдвое по сравнению с исходным. В зависимости от исследуемого материала можно использовать и большие разведения красителя. Окрашенный срез ополаскивают дистиллированной водой и дифференцируют под контролем микроскопа в растворе железоаммиачных квасцов. После этого срезы промывают в водопроводной воде не менее 30 мин при частой смене воды.
Железный гематоксилин Вейгерта
готовят в виде двух основных растворов - раствора Вейгерта 1 и раствора Вейгерта 2. Раствор Вейгерта 1 представляет собой 1% раствор гематоксилина в 90% спирте (1 г гематоксилина на 100 мл спирта). Раствор Вейгерта 2 имеет следующий состав: официнальный раствор полуторахлористого железа 4 мл, 1 мл концентрированной хлористоводородной кислоты (плотность 1,15-1,19) и 95 мл дистиллированной воды. Официальный раствор полуторахлористого железа-это 50% раствор водного хлорного железа (FеСI3* 6Н20). Перед употреблением смешивают равные объемы основных растворов. Основные растворы хранятся 3-4 мес. Смешанный раствор можно применять лишь несколько дней. Время окрашивания 1-5 мин. Затем следует промывка водопроводной водой. Срезы можно дифференцировать 0,1% раствором соляной кислоты в 70% спирте, после чего их тщательно промывают водопроводной водой. Железный гематоксилин Вейгерта должен окрашивать ядра в черный цвет. Если они приобретают коричневый цвет, то это свидетельствует о порче красителя.
Квасцовый кармин приготовляют, растворяя 3-5 г аммиачных квасцов в 100 мл дистиллированной воды при нагревании, и добавляют 1 г кармина. Раствор кипятят 15 мин, охлаждают, фильтруют и добавляют 1 мл формалина. Время окрашивания -0,5-24 ч, дифференцировка в дистиллированной воде проводится до прекращения отдачи красителя. Ядра окрашиваются в ярко-красный цвет. Окраску кармином можно проводить после импрегнации серебром или при выявлении железа.
Сафранин является прекрасным ядерным красителем, особенно для материала, фиксированного в растворах, содержащих осмий или хром. 10 г чистого сафранина или сафранина «С-ехtrа» (качество красителя имеет очень большое значение) растворяют в смеси 155 мл 96% спирта со 145 мл дистиллированной воды. Из полученного таким образом основного раствора перед употреблением берут 20 мл и добавляют 80 мл 50% спирта. Время окрашивания 24 ч. После ополаскивания в дистиллированной воде срезы дифференцируют, контролируя под микроскопом в 0,1% растворе хлористоводородной кислоты в абсолютном спирте. Затем следует промывка абсолютным спиртом, просветление в ксилоле, заключение в бальзам.
Кислые красители.
Эти красители не являются избирательно цитоплазматическими. Красители для цитоплазмы подбирают таким образом, чтобы их цвет хорошо контрастировал с окраской ядер. Для до окрашивания цитоплазмы после окраски ядер гематоксилином чаще всего используется 1% водный раствор эозина. Для срезов, окрашенных кармином, используют раствор пикриновой кислоты, полученный путем разведения водой насыщенного раствора пикриновой кислоты в отношении 1:3 (при комнатной температуре в 100 мл воды растворяется примерно 1,2 г пикриновой кислоты, следовательно, для получения насыщенного раствора следует взять чуть больше этого количества пикриновой кислоты). Время окрашивания 2-5 мин. Цитоплазма клеток и эритроцитьи красятся в желтый цвет.
Методика окрашивания срезов гематоксилин - эозином.
Эта методика наиболее часто применяется и поэтому должна быть описана более детально. Этим методом можно окрашивать целлоидиновые срезы, депарафинированные, парафиновые или замороженные срезы. Замороженньие срезы перед окрашиванием следует обезжирить, поместив их на 20-3О мин или на ночь в 96% спирт. Далее срезы переносят в дистиллированную воду. Целлоидиновые срезы переносят из одного бюкса в другой с помощью препаровальной иглы с загнутым концом. Депарафинированные и замороженные срезы можно окрашивать на предметном стекле, наливая или сливая соответствующие растворы. Растворы красителей при этом можно сливать обратно для повторного использования.
Порядок окрашивания срезов гематоксилин-эозином следующий:
1) срезы переносят в дистиллированную воду;
2) окрашивают гематоксилином Эрлиха 2-5 мин;
3) промывают в дистиллированной воде;
4) затем промывают в водопроводной воде 3-5 мин;
5) осуществляют контроль под микроскопом;
6) дифференцируют 1% раствором хлористоводородной кислоты в 70° спирте 1-2 с;
7) быстро переносят срезы в водопроводную воду на 30 мин при частой смене; в водопроводной воде вишневая окраска ядер сменяется синей;
8) осуществляют контроль под микроскопом; если хроматин и ядрышко видны недостаточно четко, то дифференцировку следует повторить (срезы можно смотреть под большим увеличением, накрыв их покровным стеклом);
9) промывают в дистиллированной воде;
10) 1% водный раствор эозина 0,5-1 мин;
11) промывают в дистиллированной воде (и дифференцируют, так как вода смывает эозин); время промывки контролируют по цвету среза;
12) проводят обезвоживание, осветляют в ксилоле, заключают в бальзам. В спиртах эозин также отмывается, так что проводить срезы по спиртам следует быстро. Время окрашивания в гематоксилине нужно установить на первых 2-3срезах и затем все срезы данного блока окрашивать одинаково. Дифференцировку в растворе хлористоводородной кислоты в спирте можно не проводить, но в этом случае структуры ядра будут менее четкими и в цитоплазме может быть синеватый фон.
Методика контрастирования (окраски) парафиновых срезов Гематоксилином и эозином (г.-э)
1) Парафиновые срезы, наклеенные на предметные стёкла, освобождают от парафина (депарафинизируют) поочерёдно погружая их в 2 Порции ксилола (толуола, бензола) – По 3 мин.
2) Производят гидратацию срезов путём поэтапного помещения их в спирты убывающей концентрации (96º, 80º, 60º, 40º, а затем в дистиллированную воду На 3-4 мин .
3) Окрашивают срезы сначала раствором ядерного (основного) красителя - гематоксилина – В течение 2 мин.
4) После этого срезы переносят в водопроводную воду, которая имеет щелочную среду, для окисления гематоксилина. При этом он приобретает синий цвет, а затеи всполаскивают в дистиллированной воде.
5) Окрашивают срезы раствором цитоплазменного (кислого) красителя - Эозина – в течение 0,5-1 мин.
6) Избыток красителя смывают дистиллированной водой в течение 1 мин.
7) Окрашенные срезы обезвоживают. Для этого их помещают в Спирты возрастающей концентрации – поочерёдно в спирты 40º, 60º, 80º, 96º, и 100º – По 1-2 мин.
8) Обезвоженные срезы просветляют в карбол-ксилоле, а затем - в двух порциях ксилола – по 2 мин .
9) Заключение срезов: на срез стеклянной палочкой наносят маленькую каплю раствора канадского бальзама (полистирола, дамар-лака и др.) и накрывают обезжиренным покровным стеклом, осторожно опуская его под углом, стремясь избежать попадания пузырьков воздуха. Сверху можно поместить небольшой грузик для удаления избытка бальзама (полистирола).
Оценка результатов окрашивания
Гематоксилин является щелочным (основным) красителем. Он окрашивает структуры клеток и тканей, имеющие кислую среду, например, ДНК и РНК в ядрах клеток, кислые гликозаминогликаны в межклеточном веществе соединительной ткани. Поэтому такие структуры называются Базофильными (от лат. Basis – основание). В окрашенном гематоксилином микропрепарате ядра клеток будут тёмно-синими или тёмно-фиолетовыми.
Эозин (от греч. заря) имеет красный или розовый цвет и является кислым красителем. Поэтому окрашивающиеся им щелочные компоненты клеток или неклеточных структур называются Оксифильными, Или ацидофильными (от греч. Oxy Или лат. Acidum – кислота), Или эозинофильными .
Следует учесть, что цитоплазма разных клеток может окрашиваться как базофильно, так и эозинофильно. Например, клетки, активно синтезирующие белковые компоненты, содержат в цитоплазме большое количество рибосом (а, следовательно, и РНК), поэтому их цитоплазма окрашивается Базофильно . Если структуры цитоплазмы окрашиваются одновременно и основными, и кислыми красителями, то они называются Нейтрофильными , или Гетерофильными .
Есть целый ряд красителей, например тиазинового ряда (азур, толуидиновый синий, метиленовый синий и др.), которые при взаимодействии с компонентами клеток и тканей изменяют свой цвет на им несвойственный (синий на красный или фиолетовый; чёрный на жёлтый или зелёный и т. д.). Такое явление получило название Метахромазия.
При соблюдении правил приготовления микропрепаратов и применении стойких красителей постоянные микропрепараты Могут сохраняться десятилетиями, не утрачивая своих первоначальных качеств.
Следует помнить , что ядерные и цитоплазменные красители обычно связываются с окрашиваемыми структурами в количествах, пропорциональных содержанию в них реагирующих компонентов. На этом основана Количественная цито - И гистохимия.
библиографическое описание:
Замечания по технике окрашивания — .
код для вставки на форум:
Замечания по технике окрашивания — .
wiki:
— .
При окраске водными красителями срезы переносят в краситель из дистиллированной воды, а при окраске спиртовыми - из соответствующего раствора спирта. После того как препарат приобретает интенсивную окраску, его промывают в воде или спирте для удаления избытка красителя (дифференцировка), контролируя этот процесс под микроскопом.
Срезы тканей после целлоидиновой и парафиновой заливки, а также полученные на замораживающем микротоме окрашивают в широкогорлых бюксах или на часовых стеклах. Одновременно окрашивают несколько срезов, промывают, дифференцируют и т.д. каждый срез отдельно.
Препараты можно помещать в красящий раствор в специальных контейнерах, предназначенных для одновременного окрашивания большого количества стекол. Если препаратов немного, то рациональнее краситель наносить непосредственно на срез по каплям с помощью пипетки. Остатки красителя можно слить в склянку и использовать повторно. Д. Кисели (1962) предлагал накрывать при этом срезы стеклянным колпаком, а для увлажнения среды оставлять под колпаком смоченную водой вату.
1. ЯДЕРНЫЕ КРАСИТЕЛИ И ИХ ПРИГОТОВЛЕНИЕ
Окрашивание ядер клеток обусловлено двумя механизмами химического взаимодействия: 1) основные красители, например анилиновые, образуют соли в присутствии ДНК и РНК; 2) образуются комплексы с ионами металлов при применении протравы. В практической работе чаще используют протравные красители. К ним относятся гематоксилин, кармин, сафранин, галлоцианин, ализарин. Хорошо окрашивают ядра такие красители, как янус зеленый, основной коричневый, оксазиновые красители (крезиловый фиолетовый, нильский голубой), тионин, азуры, метиленовый синий, основной фуксин, метиловый зеленый и др. Следует упомянуть о хороших результатах окраски ядер соком черники, которая предложена М.Д. Лавдовским еще в 1887 г.
Гематоксилин и способы его приготовления
Гематоксилин имеет растительное происхождение: его получают из эфирного экстракта кампешевого дерева. Гематоксилин хорошо растворяется в спирте и плохо в воде. Красящими свойствами обладает продукт окисления гематоксилина - гематеин, поэтому краситель становится пригодным только после созревания - окисления, на которое требуется от 10 дней до 2-3 нед. Созревание можно ускорить с помощью солей алюминия, хрома, железа и др.
Гематоксилин Эрлиха
1. Гематоксилин кристаллический 2г
2. Спирт 96% 100мл
3. Дистиллированная вода 100 мл
4. Глицерин 100 мл
5. Алюмокалиевые или алюмоаммонийные квасцы 3г
6. Ледяная уксусная кислота 10 мл
Гематоксилин растворяют в спирте, а квасцы - в дистиллированной воде, смешивают оба раствора и затем добавляют остальные компоненты. Раствор периодически перемешивают. Через 10-14 дней он приобретает темно-вишневый цвет, что свидетельствует о готовности красителя. Продолжительность окрашивания гематоксилином Эрлиха 4-6 мин. Затем следуют промывание в дистиллированной, потом в водопроводной воде, дифференцировка в 1 % солянокислом спирте, восстановление в аммиачной воде и окончательное промывание в дистиллированной воде. Для приготовления солянокислого спирта к 100мл-70% спирта добавляют 1мл концентрированной соляной кислоты. Для приготовления аммиачной воды к 50мл дистиллированной воды добавляют 2 капли крепкого аммиака.
Результат: ядра клеток тёмно-синие(оболочка, хроматин), ядерный матрикс бледно-голубой или прозрачный.
Гематоксилин Делафильда
1. Гематоксилин кристаллический 4гр
2. Спирт 96% 25мл
3. Алюмокалиевые или алюмоаммониевые квасцы 40гр
4. Дистиллированная вода 400мл
Приготовление: спирт+гематоксилин+квасцы=3-4дня на свету, перемешывая,фильтруют+100мл глицерина+100мл метилового спирта=3-4 дня на свету, фильтруют. Перед применением разбавляют в 2 раза дистиллированной водой или 2% раствором алюмокалиевых квасцов.Окрашывание 4-6 минут, промывание в дистиллированной воде, дифференцировка в солянокислом спирте, восстановление в амиачной воде, промывание в ДВ.В результате хроматин и кариолемма ярко-синие.
Гематоксилин Гарриса
1. Кристалическый гематоксилин 5 гр + спирт 50мл-96%
2. Алюмоамонийные квасцы 100гр+ ДВ 1литр
3. Смешывают + 60мл глицерина + 2,5 оксида ртути. Нагревают до 100С, остужают, фильтруют. Перед использованием до 100мл раствора добавляют 2 мл ледяной уксусной кислоты. Окраска 3-4 минуты, дает чёткие ярко-синие ядра.
Гематоксилин Гарриса в модификации Кисели
Исключил квасцы.
1. Кристалическый гематоксилин 1 гр + спирт 10мл-96%
2. Кристалический гематоксилин 20гр + ДВ 200мл
3. Смешивают, доводят до кипения, + 500мг желтого оксида ртути. Остужают, фильтруют, готов к использованию. Окраска 4-6 минут, дает ярко-синие ядра.
Гематоксилин Ганзена
4. Кристалическый гематоксилин 1 гр + спирт 10мл-100%
5. Алюмокалиевые квасцы 20гр+ ДВ 100мл
6. Смешывают + 3мл насыщеного раствора перманганата калия. Нагревают до 100С, остужают, фильтруют. Окраска 3-4 минуты, дает красно-фиолетовые ядра.
Гематоксилин Маллори(водный)
Кристалическый гематоксилин 2,5 гр + алюмоамонийные квасцы 50гр+ ДВ 1литр
Выдержывают 10 суток при 25С, +440мг перманганата калия и 2,5гр тимола, перемешивают,
фильтруют. Синие ядра.
Кислый гемалаун Майера(водный)
1. Кристалический гематоксилин 1 гр
2. Алюмоамонийные квасцы 50гр
3. ДВ 1литр
4. Йодат натрия 200мг
5. Хлоралгидрат 50гр
6. Лимонная кислота 1 гр
Квасцы растворяют в воде без нагревания, затем добавляют и растворяют гематоксилин, йодат натрия, лимонную кислоту и последним - хлоралгидрат. После растворения всех компонентов краску фильтруют, и она готова к применению.
Продолжительность окрашивания 4-6 мин.
Результат: ядра красно-фиолетовые.
Гематоксилин Кораци (водный)
1. Гематоксилин кристаллический 0,1 г
2. Йодат калия 2-3 кристал
3. Алюмокалиевые квасцы 5 г
4. Дистиллированная вода (теплая) 100 мл
Смесь перемешивают до полного растворения и добавляют 25 мл глицерина. Раствор перед использованием фильтруют. Продолжительность окрашивания 1-2 мин. Результат: ядра ярко-синие.
Железный гематоксилин Гейденгайна
1. Гематоксилин кристаллический 1 г
2. Спирт 96 % 10мл
3. Дистиллированная вода 90 мл
Краситель созревает 4 нед. Добавление 100 мг йодата натрия ускоряет «созревание» - он готов к использованию уже через 1 ч после приготовления. Окрашивание проводят разведенным в 2 раза раствором.
Продолжительность окрашивания 1 -36 ч.
Методика окрашивания
1. Препарат помещают в 2,5 % раствор железоаммонийных квасцов на 2-12 ч.
2. Ополаскивают в дистиллированной воде.
3. Окрашивают гематоксилином Гейденгайна 1-36 ч.
4. Промывают в водопроводной воде - 3 смены по 10 мин, затем обезвоживают, просветляют, заключают.
Результат: ядра и цитоплазматические структуры черные и синевато-черные.
Железный гематоксилин Брусси
1. Гематоксилин кристаллический 1 г I
2. Дистиллированная вода при 40 "С 100 мл I
3. Железоаммонийные квасцы 8 г II
4. Дистиллированная вода при 40 "С 100 мл II
Растворы I и II смешивают, фильтруют. Продолжительность окрашивания 30 с-1 мин. Затем промывают в водопроводной воде, обезвоживают, просветляют заключают.
Результат: ядра синевато-черные.
Железный гематоксилин Вейгерта
1. Гематоксилин кристаллический 1 г А
2. Спирт 96 % 100мл А
3. Раствор трихлорида железа гексагидрата 50%-4 мл В
4. Дистиллированная вода 95 мл В
5. Концентрированная соляная кислота 1 мл В
Растворы хранят в отдельных склянках с притертыми пробками. Перед использованием нужное для окрашивания количество краски получают путем смешивания растворов А и Б в пропорции 1:1.
Продолжительность окрашивания 1-2 мин, затем промывают в водопроводной воде.
Результат: ядра черно-синие.
Другие ядерные красители
Кармин
- Кармин 1 г
- Дистиллированная вода 100 мл
- Раствор кипятят 15 мин,охлаждают, фильтруют, добавлявляют
- 10 мл 40 % формалина.
Продолжительность окрашивания 30 мин-24 ч. Затем следует промывание в дистиллированной воде, дифференцировать в солянокислом спирте, обезвоживание, просветление и заключение.
Результат: ядра ярко-красные.
Сафранин
Обеспечивает получение хороших результатов после фиксации ткани в тетраоксиде осмия и особенно после применении фиксаторов, содержащих хром.
- Основной раствор:Сафранин-10г + Спирт 96-155мл + Дистилл вода-145мл
- Краситель: -Основной р-р 20мл + Спирт 50%-80мл
Продолжительность окрашивания 24 ч. Затем следуют промывание дистиллированной водой, дифференцировка в солянокислом спирте, дистиллированная вода, обезвоживание, просветление и заключение.
Результат: хроматин ядер и кариолемма ярко-красные.
Галлоцианин
- Галлоцианин 100 г
- Хромовые квасцы 5 г
- Дистиллированная вода 100 мл
Сначала растворяют квасцы, затем добавляют Галлоцианин, раствор кипятят при постоянном помешивании, охлаждают, фильтруют. Срок годности красителя 1 мес.
Продолжительность окрашивания 24-48 ч. Затем следуют промывание в 2 сменах дистиллированной воды, обезвоживание, просветление и заключение.
Результат: хроматин и тигроидное вещество синевато-черные.
Сок черники
Свежие чистые ягоды черники разминают в фарфоровой ступке, смешивают с равным объемом 96 % спирта, настаивают 1- 2 сут и фильтруют. Перед окрашиванием часть раствора разводят равным количеством 2 % водного раствора алюмокалиевых квасцов и добавляют 2-3 кристаллика тимола.
Продолжительность окрашивания 5-7 мин. Затем следуют промывание в дистиллированной воде, дифференцировка в солянокислом спирте, промывание в дистиллированной воде, обезвоживание, просветление и заключение.
Результат: ядра темно-фиолетовые.
2. ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКИЕ КРАСИТЕЛИ
Окрашивание цитоплазмы клеток происходит в результате связывания оснований и белков кислотными красителями. В группу диффузных (кислых) красителей входят карбоновые и сульфоновые кислоты, нитро-, азокрасители и др. В гистологической практике постоянно применяют эозины, пикриновую кислоту, оранжевый Г, кислый фуксин, конго красный (конгорот), азокармин, эритрозин. Чаще используют 1 % водные растворы этих красителей, но можно применять и 1 % спиртовой раствор.
Продолжительность окрашивания колеблется от 5 с до 3-5 мин в зависимости от сорта и серии красителя. Если препарат перекрашивается, то излишек краски легко удаляется при ополаскивании в дистиллированной воде и последующем обезвоживании препарата или среза в спиртах.
Смесь кислого фуксина и пикриновой кислоты (пикрофуксин) готовят из насыщенного водного раствора пикриновой кислоты и 1 % водного раствора кислого фуксина (см. главу 22).
3. Методика окраски гематоксилином и эозином
Процедура окрашивания срезов, полученных на замораживающем микротоме, после парафиновой или целлоидиновой заливки различается лишь по техническим приемам, а порядок проведения окраски одинаков.
- Раствор гематоксилина 1-20 мин
- Дистиллированная вода ополоснуть
- Солянокислый спирт дифференцировка
- Аммиачная вода срезы синеют (контроль под микроскопом)
- Проточная вода 5-10 мин
- Дистиллированная вода ополоснуть
- Раствор эозина 10 с-3 мин
- Спирт 96 %,
- карбол-ксилол, заключение.
Результат: ядра синие, цитоплазмаи межклеточное веществорозовые.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1-Гидропическая (вакуольная) дистрофия гепатоцитов
2-Баллонная дистрофия гепатоцитов
3-Воспалительная инфильтрация междольковой соединительной ткани
ЗАНЯТИЕ № 3
ТЕМА: Мезенхимальные дистрофии
№ 18 - АМИЛОИДОЗ ПЕЧЕНИ
Окраска: Конго красный
Балочное строение печени нарушено. Печеночные клетки и балки уменьшены в размерах, а местами вообще не определяются из-за отложения амилоидных масс, окрашенных в красно-оранжевый цвет. Амилоид откладывается в строме печени в стенках сосудов и желчных протоков
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1-Отложения жира в строме миокарда
2-Атрофия мышечных волокон
№22 -ГИАЛИНОЗ АРТЕРИОЛ СЕЛЕЗЕНКИ
Окраска: гематоксилин-эозин
В препарате селезенки следует найти центральные артериолы фолликулов. Стенка артериол резко утолщена, гомогенизирована, бесструктурна, окрашена в розовый цвет. Просветы артериол сужены, а местами вообще не определяются.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1.Печеночные клетки с пигментом гемосидерином
2. Гемосидерин в строме печени
№ 94 -ДИСТРОФИЧЕСКОЕ ОБЫЗВЕСТВЛЕНИЕ МИОКАРДА
Окраска: гематоксилин-эозин
В препарате виден миокард, в котором имеются разной величины и формы очаги обызвествления, окрашенные в темно-фиолетовый цвет. Они представляют собой группы мышечных волокон, подвергшихся дистрофии и некрозу с последующим пропитыванием их солями кальция. Вокруг очагов обызвествления отмечается лейкоцитарная инфильтрация как результат реактивного воспаления.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1.Атрофия печеночных балок и клеток
2.Зерна липофусцина в печеночных клетках
ЗАНЯТИЕ № 5
ТЕМА: НЕКРОЗ. ОБЩАЯ СМЕРТЬ .
№ 4- ИШЕМИЧЕСКИЙ ИНФАРКТ СЕЛЕЗЕНКИ
Окраска: гематоксилин-эозин
В препарате можно различть три зоны:
первая зона – зона некроза -представлена участком бесструктурной массы (детритом), слабо окрашенным эозином в розовый цвет с наличием осколков ядер; вторая зона – демаркационная зона – характеризуется наличием расширенных сосудов с кровоизлияниями и слабо выраженной инфильтрацией нейтрофилами, что свидетельствует о «свежести» некроза; третья зона- не измененная ткань селезенки.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1- Клубочек с сохранившимися ядрами
2- Безъядерные извитые канальцы
3- Прямые канальцы с сохранившимися ядрами
4- Межуточное вещество с сохранившимися ядрами
№5 -ИНКАПСУЛИРОВАННЫЙ ОБЫЗВЕСТВЛЕННЫЙ ОЧАГ
ТВОРОЖИСТОГО НЕКРОЗА В ЛИМФОУЗЛЕ (при туберкулезе)
Окраска: гематоксилин-эозин
Строение лимфоузла нарушено, определяются сливающиеся очаги казеозного некроза, окрашенные эозином в розовый цвет. Кое-где в детрите выявляются осколки ядер, окрашенные гематоксилином в бледно-синий цвет. Вокруг некроза возникло продуктивное воспаление и формируется соединительнотканная капсула.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1-Очаги творожистого некроза
2- Зона демаркационного воспаления с образованием капсулы
ЗАНЯТИЕ № 6
ТЕМА: НАРУШЕНИЯ КРОВО- И ЛИМФООБРАЩЕНИЯ – 1 занятие.
(полнокровие, малокровие, кровотечение, кровоизлияния, плазморрагия, нарушения содержания тканевой жидкости, нарушения лимфообращения)
№ 1 - МУСКАТНАЯ ПЕЧЕНЬ
Окраска:гематоксилин-эозин
В препарате видна ткань печени. Балочное строение долек печени сохранено, однако центральные вены и впадающие в них синусоиды резко расширены, переполнены кровью. Синусоиды на периферии долек имеют обычный вид. Гепатоциты в центре долек резко уменьшены в размерах, атрофированы, а местами не определяются. Гепатоциты на периферии долек сохранены, местами с дистрофическими изменениями.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1- Расширенные и полнокровные центральные вены
2- Расширенные и полнокровные синусоиды центральных отделов долек
3- Атрофия и некроз печеночных клеток в центре долек
4- Сохранившиеся гепатоциты периферических отделов долек
№ 2 -БУРАЯ ИНДУРАЦИЯ ЛЕГКОГО
Окраска: гематоксилин-эозин
В препарате видна ткань легкого с расширенными межальвеолярными перегородками и суженными просветами альвеол. Межальвеолярные перегородки расширены за счет разрастания в них соединительной ткани, а также за счет полнокровия кровеносных сосудов, вокруг которых можно видеть диапедезные кровоизлияния. В межальвеолярных перегородках и в просветах альвеол содержатся скопления макрофагов, поглотивших гемосидерин и называющихся гемосидерофагами (окрашиваются в коричневый цвет). В просветах альвеол можно видеть отечную жидкость, окрашенную эозином в слабо розовый цвет.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1-Утолщенные и склерозированные альвеолярные перегородки
2-Расширенные и переполненные кровью сосуды
3-Скопления гемосидерофагов
4-Отечная жидкость в альвеолах
Окраска: гематоксилин-эозин
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1-Полнокровие сосудов легкого
2-Скопление отечной жидкости в полостях легочных альвеол
3-Раковые эмболы в просвете лимфатических сосудов
№81- ОБТУРИРУЮЩИЙ ТРОМБ С ОРГАНИЗАЦИЕЙ, КАНАЛИЗАЦИЕЙ
И ВАСКУЛЯРИЗАЦИЕЙ
Окраска: гематоксилин-эозин
В препарате - поперечный срез сосуда, просвет которого выполнен соединительной тканью, заместившей обтурирующий тромб и остатками тромба. Граница между интимой и соединительной тканью неразличима. Среди соединительной ткани видны множественные мелкие и единичные крупные каналы, выстланные эндотелием (это вновь образованные сосуды).
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1-Зона некроза
2-Зона демаркационного воспаления
3. Неизмененная ткань почки:
№ 8 -КРАСНЫЙ ТРОМБ В АРТЕРИИ ГОЛОВНОГО МОЗГА
Окраска: гематоксилин-эозин
Просвет артерии заполнен гомогенными эозинофильными массами - красным тромбом
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1-Миокард
2-Фибрин на поверхности эпикарда
3-Грануляционная ткань, врастающая в фибрин.
№ 42 - ГНОЙНЫЙ МЕНИНГИТ
Окраска: гематоксилин-эозин
Мягкие мозговые оболочки резко утолщены преимущественно за счет инфильтрации гнойным экссудатом, состоящим из множества нейтрофильных лейкоцитов. Сосуды оболочек резко расширены, полнокровны. Ткань головного мозга существенно не изменена.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1-Гнойный экссудат в мозговых оболочках
2-Полнокровные сосуды мозговых оболочек
3-Ткань головного мозга
№ 104- СЕРОЗНО-ГНОЙНАЯ ПНЕВМОНИЯ
Окраска: гематоксилин-эозин
Просветы альвеол выполнены экссудатом различного состава. В одних -экссудат состоит из гомогенной белковой массы, однородно окрашенной эозином в розовый цвет, с небольшой примесью нейтрофильных лейкоцитов и клеток слущенного альвеолярного эпителия, что соответствует серозному воспалению. В других альвеолах в экссудате преобладают нейтрофильные лейкоциты, что характерно для гнойного воспаления. Наличие в одном и том же препарате фокусов серозного и гнойного воспаления позволяет назвать его серозно-гнойной пневмонией. В межальвеолярных перегородках определяются расширенные полнокровные сосуды и слабо выраженная лейкоцитарная инфильтрация.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1-серозный экссудат в просвете альвеол
2-гнойный экссудат в просвете альвеол
ЗАНЯТИЕ № 9
ТЕМА: Продуктивное воспаление
№ 52- МИЛИАРНЫЙ ТУБЕРКУЛЕЗ ЛЕГКИХ
Окраска: гематоксилин-эозин
В легочной ткани обнаруживаются множественные гранулемы, состоящие преимущественно из эпителиоидных клеток. В некоторых гранулемах определяются одна-две гигантские многоядерные клетки Пирогова-Лангханса с характерным расположением ядер в виде частокола по периферии клетки. В периферических отделах бугорка обнаруживается вал из лимфоцитов с небольшой примесью плазматических клеток. В некоторых бугорках обнаруживаются фокусы творожистого некроза.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
2-Обызвествленная соединительнотканная капсула
3-Реактивное воспаление вокруг пораженного мышечного волокна
№ 56- ЦИСТИЦЕРКОЗ ГОЛОВНОГО МОЗГА(ветвистая форма)
Окраска: гематоксилин-эозин
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1 – Плазматические клетки
2 –Клетки Микулича
3 –Гиалиновые шары
ЗАНЯТИЕ № 10
ТЕМА: Процессы компенсации и адаптации
№ 55- ЖЕЛЕЗИСТАЯ ГИПЕРПЛАЗИЯ ЭНДОМЕТРИЯ
Окраска: гематоксилин-эозин
В препарате представлен соскоб эндометрия. Эндометрий резко утолщен в связи с наличием большого количества маточных желез (крипт) отличающихся большим разнообразием по величине и форме. Однако все железы выстланы однослойным призматическим эпителием. Строма эндометрия сочная, отечная, местами инфильтрирована лейкоцитами.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1-Резкое утолщенные мышечные волокна
2-Увеличенные в размерах мышечные ядра
№ 109- ГИПЕРТРОФИЯ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ (коллоидный зоб)
Окраска: гематоксилин-эозин
Фолликулы щитовидной железы различной формы, многие из них резко увеличены в размере, заполнены коллоидом. Эпителиальные клетки фолликулов уплощены.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1- сосочковые разрастания, покрытые эпителием
№ 67- АДЕНОКАРЦИНОМА ТОЛСТОЙ КИШКИ
Окраска: гематоксилин-эозин
В препарате виден фрагмент стенки толстой кишки, в одном участке которого стенка кишки имеет обычное строение. В другом участке определяется опухоль, представленная атипичными эпителиальными клетками, формирующими атипичные железы. Опухоль инвазирует подслизистый и мышечный слои стенки кишки.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1- Гнезда раковых клеток
2-Раковые жемчужины (центры ороговения)
№ 64- СКИРР ГРУДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
Окраска: гематоксилин-эозин
Опухоль представлена мелкими группами или скоплениями атипичных гиперхромных малодифференцированных раковых клеток, расположенных среди широких прослоек зрелой волокнистой гиалинизированной соединительной ткани. Таким образом, в опухоли строма преобладает над паренхимой.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1- Гнезда опухолевых клеток
2-Гиалинизированная строма опухоли
ЗАНЯТИЕ № 12
ТЕМА: Эпителиальные опухоли органоспецифические
№ 80 -ХОРИОНЭПИТЕЛИОМА
Окраска: гематоксилин-эозин
В препарате представлена ткань матки. В миометрии разрастается опухолевая ткань, построенная из двух видов клеток: 1) клеток округлой и полигональной формы со светлой цитоплазмой и рыхлым, окрашенным в сиреневый цвет ядром (это клетки цитотрофобласта, клетки Лангханса), 2) крупных, уродливой формы клеточных симпластов с интенсивно окра-шенными множественными ядрами. Эти клетки образуют синтиций и называются синтициальными клетками. Описанные два вида клеток имеют сходство с хориальным эпителием ворсин, который является источником развития опухоли. Между клетками опухоли имеются кровяные лакуны, или «озера». Собственная строма в опухоли отсутствует.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1 - Крупные полигональные клетки, формирующие разной величины островки
2 - Узкие прослойки соединительной ткани, разделяющие клеточные островки опухоли
№ 15 -ФИБРОАДЕНОМА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
Окраска: гематоксилин-эозин
Опухоль состоит из 2 компонентов: а) причудливо разрастающихся резко деформированных протоков с едва различимыми просветами; б) соединительной ткани. В одних участках опухоли соединительная ткань разрастается концентрически вокруг протоков и поэтому фиброаденома называется периканаликулярной, в других - соединительная ткань выпячивается в просвет протоков, их просвет становится щелевидным, что называется интраканаликулярной фиброаденомой.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1- опухолевые клетки, расположенные концентрически
2- псаммозные тельца
№ 108- НЕВРИНОМА (ШВАННОМА)
Окраска: гематоксилин-эозин
В препарате видна опухоль, построенная из клеток шванновской оболочки периферических нервных стволов. Она состоит из однородного цитоплазматического синтиция с наличием палочковидных ядер, образующих группы, в виде палисадных фигур - это полисадные структуры или тельца Верокаи.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1-Пучки гладкомышечных волокон
2-Пучки соединительнотканных волокон
ЗАНЯТИЕ № 14
ТЕМА: Опухоли кроветворной и лимфатической тканей
№ 32 -ЛИМФОГРАНУЛЕМАТОЗ
Окраска: гематоксилин-эозин
Строение лимфоузла резко изменено. В нем разрастается опухолевая ткань, состоящая из многоядерных клеток Березовского-Штернберга-Рид, больших и малых клеток Ходжкина. Определяются также эозинофилы, а количество лимфоидных клеток резко уменьшено. Кроме этого отмечаются склероз и очаги некроза опухоли.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1-Дольки печени
2-Скопления лейкозных клеток по периферии долек (лимфомы)
№141- ПЕЧЕНЬ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ МИЕЛОИДНОМ ЛЕЙКОЗЕ
Окраска: гематоксилин-эозин
По ходу синусоидов внутри печеночных долек и в меньшей степени в портальных трактах отмечается диффузное разрастание лейкозных клеток миелоидного ряда.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1. Диффузная лейкозная инфильтрация
ЗАНЯТИЕ № 15
ТЕМА: Атеросклероз. Артериальная гипертензия. Ишемическая болезнь сердца. Сосудистые заболевания нервной системы.
№ 8- ДИАПЕДЕЗНЫЕ КРОВОИЗЛИЯНИЯ В ГОЛОВНОМ МОЗГЕ
Окраска: гематоксилин-эозин
В ткани головного мозга видны мелкие и более крупные кровоизлияния, которые расположены преимущественно вокруг расширенных и резко полнокровных сосудов. Стенки сосудов местами неразличимы вследствие обильного пропитывания их эритроцитами. Кое-где можно видеть глыбки бурого пигмента гемосидерина, свидетельствующие о начале рассасывания ранее излившихся кровяных масс.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1- Некротизированные мышечные волокна, лишенные ядер
2- Клеточная инфильтрация и очаги кровоизлияний
3- Нормальная мышечная ткань
№ 130- АТЕРОСКЛЕРОТИЧЕСКАЯ БЛЯШКА КОРОНАРНОЙ АРТЕРИИ
Окраска: пикрофуксином по Ван-Гизон
Просвет артерии резко сужен в связи с резким диффузным утолщением стенки за счет отложения липоидных масс с последующим разрастанием в ней соединительной ткани. Внутренняя эластическая мембрана оттеснена к средней оболочке.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1-Очаг дезорганизации
2-Тромботические массы
3-Воспалительная инфильтрация
4-Разрастание соединительной ткани.
№ 83- РЕВМАТИЧЕСКИЙ МИОКАРДИТ
Окраска: гематоксилин-эозин
В расширенных межмышечных прослойках вокруг сосудов видны гранулемы. Это клеточные инфильтраты, состоящие преимущественно из лимфоцитов, макрофагов, нейтрофилов и эозинофилов, а также – фибробластов.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1-разрастание опухоли - аденокарциномы
№ 93 - ХРОНИЧЕСКАЯ ЯЗВА ЖЕЛУДКА С ОБОСТРЕНИЕМ
Окраска: гематоксилин-эозин
В стенке желудка имеется глубокий дефект, захватывающий слизистую и подслизистую оболочки. В области дефекта один край слизистой оболочки подрыт, другой пологий. В дне дефекта определяются: а) фибринозно-гнойный экссудат, б) фибриноидный некроз, в) грануляционная ткань, г) соединительная ткань.
О Б О З Н А Ч Е Н И Я:
1- Обильная инфильтрация слоев стенки отростка лейкоцитами
2- Язвенные дефекты в слизистой отростка
№ 144- ОСТРЫЙ ПАНКРЕАТИТ
©2015-2019 сайт
Все права принадлежать их авторам. Данный сайт не претендует на авторства, а предоставляет бесплатное использование.
Дата создания страницы: 2016-08-07
Орсеин
Эта гистологическая окраска используется для выявления эластиновых волокон, особенно это актуально в патологической анатомии кровеносных сосудов. Этот краситель добывается из нескольких видов лишайников. На снимке ниже представлены эластиновые мембраны аорты - самого крупного сосуда тела человека, функция которого заключается смягчить, мощную «ударную волну» сердечного сокращения и провести поток крови к более мелким ветвям. Аорта относится к сосудам эластического типа, так как в ее стенке содержится множество таких эластиновых мембран, куда больше чем в артериях других типов.
Автор фотографии: уточняется
Источник: University of Tasmania. School of Medicine secure.health.utas.edu.au
Осмия тетрооксид (Оксид осмия(VIII))
Другая окраска на жироподобные вещества, хотя сейчас, чаще используется как фиксатор для приготовления препаратов для электронной микроскопии. Он связывает ненасыщенные липиды (в области двойных связей) и, таким образом ткани с большим количеством полиненасыщенных жиров окрасятся в черный цвет. На снимке ниже - отличный пример поперечный срез нервного волокна. Черные кружки - отдельные аксоны с их оболочкой, которая богата миелином - веществом, являющегося своего рода изолятором для нервного волокна, и способствующего распространению нервного импульса, а также очень охотно связывающим высший оксид осмия.
Автор фотографии: уточняется
Источник:vetmed.vt.edu
Изображение изстатьиHistopathologic Changes in Growth-Plate Cartilage Following Ischemic Necrosis of the Capital Femoral Epiphysis An Experimental Investigation in Immature Pigs
. Harry K.W. Kim
, MD, FRCS(C); Phi-Huynh Su
, BSc; Yu-Shan Qiu
, MD
,
опубликованной в
J Bone Joint Surg Am
, 2001 May;83(5):688-697
Источник:jbjs.org
Окраска по Фон Косса (von Kossa)
Эта окраска используется для исследования степени минерализации ткани, то есть выявления выпавших в ткани нерастворимых фосфатов. Принцип окраски заключается в преципитации ионов серебра в кислой среде. Фотохимический распад образующихся фосфатов серебра до металлического серебра, происходящий под воздействием света (процесс, по своей сути, аналогичен таковому происходящему при печати фотографий) позволяет выявить наличие в ткани фосфатов, (чаще всего именно фосфатов кальция), но окраска выявляет лишь присутствие фосфатов, а не кальция самого по себе. Для выявления солей кальция требуются другие окраски, например, уже описанный, ализарин красный. Цветовая схема при этой окраске следующая: фосфаты кальция в массивных депозитах - черного цвета, в мелкодисперсных отложениях - серого. Клеточные ядра - красные, а цитоплазма клеток - светло-розового цвета.
Автор фотографии: уточняется
Источник:iupui.edu
Окраска берлинской лазурью
Она же железная лазурь, прусский синий, парижская лазурь, прусская лазурь, гамбургская синь, нейблау, в гистологии же известна как реакция Перлса. Этот метод очень распространен в гистологии для выявления в тканях соединений железа (например, при диагностике гемохроматозов и выявления гемосидероза - состояний при которых в тканях, по тем или иным причинам, накапливается избыток соединений железа, что, в конечном счете, приводит к недостаточности внутренних органов). Но, что интересно, здесь используется не готовый пигмент для окраски, а образование пигмента в этом случае, происходит непосредственно в срезе ткани и его образование, связанное с присутствием соединений железа, расценивается как положительная реакция.
Оригинальная методика окраски, описанная в 1867 году как «берлинская лазурь Перлса» названа в честь ее автора - германского патолога Макса Перлса (Max Perls) (1843-1881), использовавшего растворы гексацианоферрата (II) калия и соляной кислоты. Депозиты соединений железа в тканях под действием этих растворов образуют собственно берлинскую лазурь, гранулы которой, цвета разных оттенков синего, видны в препарате под микроскопом.
Макрофаги нагруженные железосодержащим пигментом гемосидерином в печени мыши. Селезенка является своего рода "кладбищем для эритроцитов" здесь эритроциты отслужившие свой век (это около 120 дней) задерживаются и разрушаются, а из пигмента гемоглобина извлекается "железо" и используется для синтеза новых молекул кислородсвязывающего белка - гемоглобина.
Автор фотографии: уточняется
Источник: iupui.edu
Срез ткани легкого со скоплениями макрофагов нагруженных гемосидерином. Такие скопления появляются при хронической "застойной" левожелудочковой сердечной недостаточности, когда в системе легочной артерии поднимается давление, из-за того что сердце не может "перекачать" кровь из малого в большой круг кровобращения. Когда давление в ветвях легочной артерии повышено, в полоси альвеол так или иначе начинают проникать эритроциты, они фагоцитируются альвеолярными макрофагами в цитоплазме которых, со временем, накапливается бурый железосодержащий пигмент - гемосидерин, когда таких клеток становится достаточно много (при прогрессирующей сердечной недосточности) они начинают выделятся с мокротой, которая приобретает ржавый оттенок, в такой мокроте при микроскопии можно выявить эти альвеолярные макрофаги, наполненные гемосидерином, их иногда называют клетками сердечных пороков, так как такая степень сердечной недостаточности особенно часто наблюдается при пороках сердца, хотя они также встречаются и при легочных кровотечениях и инфарктах легкого.
Автор фотографии: Yale Rosen
Источник: flickr.com/photos/pulmonary_pathology
Пикросириус красный
Применяется для селективного выявления коллагена I и III типа. Окрашенные по этому методу препараты могут быть исследованы как при помощи стандартной светлопольной световой микроскопии, тогда коллагеновые волокна будут окрашены в ярко-красный цвет, на бледно-желтом фоне, а клеточные ядра, в идеале, - черного цвета, но также могут быть серые или коричневые.
Изображение из статьи “Salt Induces Myocardial and Renal Fibrosis in Normotensive and Hypertensive Rats ”. Henry C. M
. Yu
, MBChB, MRCP, FRACP, FHKCP; Louise M. Burrell
, MBChB, MD, FRACP; M. Jane Black
, BSc, PhD; Leonard L. Wu
, PhD; Rodney J. Dilley
, BSc, PhD; Mark E. Cooper
, MBBS, PhD, FRACP; Colin I. Johnston
, MBBS, FRACP