В последние годы с появлением новых технологий: гибридом, бактериальных, векторных и фаговых систем - произошел прорыв в технологии производства профилактических и лечебных иммуноглобулинов.
Уже более 20 лет лицензированы восемь моноклональных антител для клинического применения, причем три из них - гетерогибридомные (мышь-человек), пять - «гуманизиро-ванные» мышиные моноклональные антитела. Однако среди них профилактических или лечебных лицензированных противочумных моноклональных антител нет, что предположительно можно объяснить высокой степенью агрессивности возбудителя чумы, скоротечностью патологического процесса и сложностью до конца не изученного пато- и иммуногенеза чумы с преобладанием системы клеточной защиты организма.
Активная иммунизация . УБИТЫЕ ЦЕЛЬНОКЛЕТОЧНЫЕ ВАКЦИНЫ. Вакцинопрофилактика чумы насчитывает более 100 лет. Первые вакцины были приготовлены из убитых различными способами бактерий чумы в конце XIX - начале XX в. Наиболее широкое распространение, особенно в Индии, получила инактивированная нагреванием и консервированная фенолом вакцина Хавкина. Она способствовала снижению заболеваемости и смертности от чумы при испытаниях в очагах эпидемий. На основании многолетнего опыта массовых прививок убитыми корпускулярными вакцинами в Манчжурии, на Яве и Мадагаскаре исследователи пришли к заключению, что люди приобретают относительный иммунитет к чуме, о чем свидетельствовали случаи заболевания среди привитых, хотя и реже, чем у невакцинированных пациентов.
Опасаясь реверсии вирулентности живой противочумной вакцины EV, превосходящей по эпидемиологической эффективности убитые вакцины, и ссылаясь на ее высокую реактогенность, специалисты в США разработали противочумную вакцину USP, состоящую из убитых формальдегидом микробов вирулентного штамма Y. pestis 195Р. Эта вакцина была лицензирована и выпускалась с 1946 по 1998 г. Аналогичную USP противочумную вакцину из вышеназванного штамма производят в Австралии; она лицензирована для клинического применения только внутри страны. Вакцину вводят двукратно с интервалом 1-4 нед и затем осуществляют бустерную прививку через 6 мес. Жидкая противочумная инактивированная вакцина I.P., представляющая собой усовершенствованную вакцину Хавкина, производится в Индии.
ЖИВЫЕ АТТЕНУИРОВАННЫЕ ВАКЦИНЫ. Массовое применение живых вакцин в 1920-30-е гг. в эндемичных по чуме очагах дало убедительные доказательства их безопасности и эффективности по сравнению с убитыми противочумными вакцинами. При этом живая противочумная вакцина в зависимости от условий применения и инфицирующей дозы в определенной степени защищала от легочной формы чумы. За прошедшие десятилетия живой противочумной вакциной были привиты миллионы людей без каких-либо серьезных осложнений. Из множества предложенных для применения чумных аттенуированных вакцинных штаммов наибольшим преимуществом обладал штамм Y. pestis EV, полученный французскими учеными Жираром и Робиком в результате ежемесячных пересевов на питательном агаре при температуре 18-20 °С в течение 5 лет. В 1936 г. вакцинный штамм EV был передан Жираром из Пастеровского института в г. Тананариве (о. Мадагаскар) советским ученым.
С 1942 г. в СССР были организованы массовые прививки чумной живой вакциной ЕВ. В настоящее время коммерческую (лицензированную) противочумную живую сухую вакцину из штамма Y. pestis EV линии НИИЭГ для чрескожного и аэрозольного применения производят в РФ в Ставропольском противочумном институте, а в 48-м ЦНИИ МО РФ (г. Киров) выпускается препарат и для при-менения внутрь. Аналогичную вакцину (кроме таблеток) производят в бывшем Алма-Атинском противочумном институте. Следует отметить, что коммерческую противочумную живую вакцину выпускают также в Индонезии из другого аттенуированного штамма Y. pestis - Харбин. В соответствии с современными достижениями биотехнологии, микробиологии, биохимии в РФ производство противочумной живой сухой вакцины на всех этапах технологического процесса, начиная от приготовления посевного материала и заканчивая лиофильной сушкой препарата и фасовкой готовой продукции, постоянно совершенствуется.
Препарат представляет собой лиофилизированную живую культуру вакцинного штамма чумного микроба ЕВ линии НИИЭГ со стабилизатором. Вакцинацию проводят однократно подкожным, накожным, внутрикожным или ингаляционным способом. Для формирования иммунитета против легочной чумы предпочтительнее инга-ляционный способ введения вакцины. При чрескожной иммунизации чувствительных к чуме животных вакцинным штаммом ЕВ альвеолярные макрофаги, в отличие от перитонеальных, претерпевают изменения, не затрагивающие их бак-терицидную активность и не сопровождающиеся перераспределением их субпопу-ляций. В то же время аэрогенная иммунизация вызывает более интенсивную по сравнению с перитонеальными клетками активацию альвеолярных макрофагов, вследствие чего происходит перераспределение субпопуляций и перестраивается характер фагоцитоза - от незавершенного к завершенному.
СУБЪЕДИНИЧНЫЕ (ХИМИЧЕСКИЕ) ВАКЦИНЫ. К препаратам I поколения чумных вакцин относятся убитые корпускулярные и живые аттенуированные вакцины; II поколение представлено химическими (субъединичными) вакцинами на основе протективных антигенов.
В настоящее время в связи с прекращением производства в 1998 г. в США противочумной вакцины USP интенсивно проводятся исследования по созданию химической вакцины, в состав которой входят протективные антигены Y. pestis. Наиболее эффективной считают химическую противочумную вакцину, содержащую капсульный FI- и V-антиген, которая в экспериментах на лабораторных животных, в том числе на приматах, защищает их от бубонной и легочной чумы, вызванной как F, так и F-штаммами Y. pestis (в отличие от вакцины USP, обладающей защитным эффектом, в основном против чрескожного заражения), причем протективной активностью обладает в отдельности как капсульный FI-антиген, так и (в большей степени) V-антиген, в том числе V-антиген Y. pseudotuberculosis. Проведенные недавно клинические испытания на 145 добровольцах субъединич- ной чумной вакцины (rFI+rV) показали ее безопасность и иммуногенность. В РФ разрабатывают чумную химическую вакцину, состоящую из капсульного антигена FI Y. pestis и основного соматического антигена Y. pseudotuberculosis. Ее назначение - ревакцинация людей, изначально вакцинированных живой противочумной вакциной, которая создает полноценный грунд-иммунитет Отметили высокую протективную активность на беспородных мышах антигенного препарата субклеточных фракций Y. pestis и подтвердили активность субклеточных фракций в смеси с суммарной ДНК Y. pestis, обладающей ярко выраженной способностью активировать как неспецифическую, так и специфическую резистентность организма у человека и животных.
ВАКЦИНЫ (лат. vaccinus коровий) - препараты, получаемые из бактерий, вирусов и других микроорганизмов или продуктов их жизнедеятельности и применяемые для активной иммунизации людей и животных с целью специфической профилактики и лечения инфекционных болезней.
История
Еще в древние времена было установлено, что перенесенная однажды заразная болезнь, напр, оспа, бубонная чума, предохраняет человека от повторного заболевания. В последующем эти наблюдения развились в учение о постинфекционном иммунитете (см.), т. е. о повышенной специфической устойчивости против возбудителя, наступающей после перенесения вызванной им инфекции.
Давно было замечено, что люди, перенесшие болезнь в легкой форме, становятся невосприимчивыми к ней. На основе этих наблюдений у многих народов применялось искусственное заражение здоровых людей инфекционным материалом в надежде на легкое течение болезни. Например, с этой целью китайцы вкладывали в нос здоровым людям высушенные и размельченные оспенные струпья от больных. В Индии размельченные оспенные струпья прикладывали к коже, предварительно натертой до ссадин. В Грузии с той же целью делали уколы кожи иглами, смоченными оспенным гноем. Искусственную прививку оспы (вариоляцию) стали применять и в Европе, в частности в России, в 18 в., когда эпидемии оспы приняли угрожающие размеры. Однако этот метод предохранительных прививок не оправдался: наряду с легкими формами заболевания у многих привитая оспа вызывала тяжелое заболевание, а сами привитые становились источниками заражения окружающих. Поэтому в начале 19 в. вариоляция в европейских странах была запрещена. Африканские народы продолжали применять ее и в середине 19 в.
В связи с распространением вариоляции искусственные прививки заразного материала предпринимались и при некоторых других инфекциях: кори, скарлатине, дифтерии, холере, ветряной оспе. В России в 18 в. Д. С. Самойлович предлагал прививать гной из чумных бубонов лицам, непосредственно соприкасающимся с больными. Указанные попытки предохранения людей от инфекционных болезней сохраняют теперь лишь исторический интерес.
Введение в организм человека или домашних животных современных В. имеет целью добиться выработки прививочного иммунитета, аналогичного постинфекционному иммунитету, но с исключением опасности развития инфекционной болезни в результате прививок (см. Вакцинация). Впервые такая В. для иммунизации людей против оспы была получена английским врачом Э. Дженнером с использованием инфекционного материала от коров (см. Оспопрививание). Дата публикации труда Э. Дженнера (1798) считается началом развития вакцинопрофилактики, к-рая в течение первой половины 19 в. получила широкое распространение в большинстве стран мира.
Дальнейшее развитие учения о В. связано с работами основоположника современной микробиологии - Л. Пастера, который установил возможность искусственного ослабления вирулентности патогенных микробов (см. Аттенуация) и применения таких «аттенуированных» возбудителей для предохранительных прививок против холеры кур, сибирской язвы с.-х. животных и бешенства. Сопоставив свои наблюдения с открытой Э. Дженнером возможностью защиты людей от натуральной оспы прививкой им коровьей оспы, Л. Пастер создал учение о предохранительных прививках, а применяемые для этой цели препараты предложил в честь открытия Э. Дженнера называть В.
На последующих этапах развития учения о вакцинах большое значение имели работы Η. Ф. Гамалеи (1888), Р. Пфейффера и В. Колле (1898), показавшие возможность создания иммунитета не только прививками ослабленных живых микробов, но и убитыми культурами возбудителей болезней. Η. Ф. Гамалеи показал также принципиальную возможность иммунизации химическими В., получаемыми извлечением из убитых микробов иммунизирующих фракций. Большое значение имело открытие Г. Рамоном в 1923 г. нового вида вакцинирующих препаратов - анатоксинов.
Виды вакцин
Известны следующие виды вакцин: а) живые; б) убитые корпускулярные; в) химические; г) анатоксины (см.). Препараты, предназначенные для иммунизации против какой-либо одной инфекционной болезни, называют моновакцинами (напр., холерная или брюшнотифозная моновакцины). Дивакцины - препараты для иммунизации против двух инфекций (напр., против тифа и паратифа В). Большое значение имеет разработка препаратов, предназначенных для одновременной вакцинации против нескольких инфекционных болезней. Такие препараты, называемые ассоциированными В., очень облегчают организацию профилактических прививок в противоэпидемической практике. Примером ассоциированной вакцины может служить вакцина АКДС, в состав к-рой входит антиген коклюшного микроба, столбнячный и дифтерийный анатоксины. При правильном сочетании компонентов ассоциированных В. они способны создавать иммунитет в отношении каждой инфекции, практически не уступающей иммунитету, получаемому в результате применения отдельных моновакцин. В иммунологической практике применяется также термин «поливалентные» В., когда препарат предназначен для прививок против одной инфекции, но включает несколько разновидностей (серологических типов) возбудителя, напр, поливалентные В. против гриппа или против лептоспирозов. В отличие от применения ассоциированных В. в форме единого препарата, принято называть комбинированной вакцинацией введение нескольких В. одновременно, но в разные участки тела вакцинируемого.
С целью повышения иммуногенности В., особенно химических и анатоксинов, их применяют в форме препаратов, адсорбированных на минеральных коллоидах, чаще всего на геле гидроокиси алюминия или фосфата алюминия. Применение адсорбированных В. удлиняет период воздействия антигенов (см.) на организм привитого; кроме того, адсорбенты проявляют неспецифическое стимулирующее действие на иммуногенез (см. Адъюванты). Адсорбирование некоторых химических В. (напр., брюшнотифозной) способствует снижению их высокой реактогенности.
Каждый из указанных выше видов В. имеет свои особенности, положительные и отрицательные свойства.
Живые вакцины
Для приготовления живых В. применяют наследственно измененные штаммы (мутанты) патогенных микробов, лишенные способности вызывать специфическое заболевание у вакцинируемого, но сохранившие свойство размножаться в привитом организме, заселять в большей или меньшей степени лимф, аппарат и внутренние органы, вызывая скрытый, без клинического заболевания, инфекционный процесс - вакцинную инфекцию. Привитой организм может реагировать на вакцинную инфекцию местным воспалительным процессом (преимущественно при накожном способе вакцинации против оспы, туляремии и других инфекций), а иногда и общей непродолжительной температурной реакцией. Некоторые реактивные явления при этом могут быть обнаружены при лабораторных исследованиях крови привитых. Вакцинная инфекция, даже если она протекает без видимых проявлений, влечет за собой общую перестройку реактивности организма, выражающуюся в выработке специфического иммунитета против заболевания, вызываемого патогенными формами того же вида микроба.
Выраженность и продолжительность поствакцинального иммунитета различны и зависят не только от качества живой вакцины, но и от иммунологических особенностей отдельных инфекционных болезней. Так, напр., оспа, туляремия, желтая лихорадка ведут к развитию практически пожизненной невосприимчивости у переболевших. В соответствии с этим высокими иммунизирующими свойствами обладают и живые В. против названных болезней. В отличие от этого, трудно рассчитывать на получение высокоиммуногенных В., напр, против гриппа или дизентерии, когда сами эти заболевания не создают достаточно длительного и напряженного постинфекционного иммунитета.
Среди других видов вакцинных препаратов живые В. способны создавать у привитых наиболее выраженный поствакцинальный иммунитет, приближающийся по напряженности к постинфекционному иммунитету, но продолжительность его все же меньше. Напр., высокоэффективные В. против оспы и туляремии способны обеспечить устойчивость привитого человека против заражения на протяжении 5-7 лет, но не пожизненно. После прививок против гриппа лучшими образцами живых В. выраженный иммунитет сохраняется в ближайшие 6-8 мес.; постинфекционный иммунитет против гриппа резко падает к полутора - двум годам после болезни.
Вакцинные штаммы для приготовления живых В. получают различными путями. Э. Дженнер отобрал для вакцинации против оспы людей субстрат, содержащий вирус коровьей оспы, обладающий полным антигенным сходством с вирусом оспы человека, но маловирулентный для людей. Подобным образом отобран бруцеллезный вакцинный штамм № 19, относящийся к слабопатогенному виду Br. abortus, вызывающий бессимптомную инфекцию у привитых с последующим развитием иммунитета ко всем видам бруцелл, в т. ч. и к наиболее опасному для человека виду Br. melitensis. Однако отбор гетерогенных штаммов относительно редко позволяет найти вакцинные штаммы нужного качества. Чаще приходится прибегать к экспериментальному изменению свойств патогенных микробов, добиваясь лишения их патогенности для человека или вакцинируемых домашних животных при сохранении иммуногенности, связанной с антигенной полноценностью вакцинного штамма и с его способностью размножаться в привитом организме и вызывать бессимптомную вакцинную инфекцию.
Методы направленного изменения биол, свойств микробов для получения вакцинных штаммов разнообразны, но общей чертой этих методов является более или менее длительное культивирование возбудителя вне организма животного, чувствительного к данной инфекции. Для ускорения процесса изменчивости экспериментаторы применяют те или иные воздействия на культуры микробов. Так, Л. Пастер и Л. С. Ценковский для получения сибиреяз венных вакцинных штаммов культивировали возбудителя в питательной среде при повышенной против оптимума температуре;
А. Кальметт и Герен (С. Guerin) длительно, в течение 13 лет, культивировали туберкулезную палочку в среде с желчью, в результате чего получили всемирно известный вакцинный штамм БЦЖ (см.). Подобный прием длительного культивирования в неблагоприятных условиях среды применил Н. А. Гайский для получения высокоиммуногенного вакцинного туляремийного штамма. Иногда лабораторные культуры патогенных микробов утрачивают свою патогенность «спонтанно», т. е. под влиянием причин, которые не учитываются экспериментатором. Так был получен чумной вакцинный штамм EV [Жирар и Робик (G. Girard, J. Robie)], бруцеллезный вакцинный штамм № 19 [Коттон и Букк (W. Cotton, J. Buck)], слабореактогенный вариант этого штамма № 19 В А (П. А. Вершилова), применяемый в СССР для вакцинации людей.
Спонтанной утрате патогенности микробных культур предшествует появление в их популяции отдельных мутантов с качеством вакцинных штаммов. Поэтому вполне оправдан и перспективен метод селекции вакцинных клонов из лабораторных культур возбудителей, популяции которых в целом еще сохраняют патогенность. Такая селекция позволила H. Н. Гинсбургу получить сибиреязвенный вакцинный штамм - мутант СТИ-1, пригодный для вакцинации не только животных, но и людей. Аналогичный вакцинный штамм № 3 был получен А. Л. Тамариным, а Р. А. Салтыков селекционировал из патогенной культуры возбудителя туляремии вакцинный штамм № 53.
Вакцинные штаммы, полученные любым методом, должны быть апатогенны, т. е. неспособны вызывать специфическое инфекционное заболевание, в отношении человека и домашних животных, подвергающихся профилактической вакцинации. Но такие штаммы могут сохранять в той или иной мере ослабленную вирулентность (см.) для мелких лабораторных животных. Напр., апатогенные для человека туляремийные и сибиреязвенные вакцинные штаммы проявляют ослабленную вирулентность при введении белым мышам; часть животных, привитых массивными дозами живой вакцины, погибает. Это свойство живых В. не вполне удачно принято называть «остаточной вирулентностью». С наличием ее нередко связана и иммунологическая активность вакцинного штамма.
Для получения вакцинных штаммов вирусов применяется длительное пассирование их в организме одного и того же вида животных, иногда не являющихся естественными хозяевами данного вируса. Так, антирабическая вакцина готовится из штамма фиксированного вируса (virus fixe) Л. Пастера, полученного из вируса уличного бешенства, многократно пассированного через мозг кролика (см. Антирабические прививки). В результате этого резко возросла вирулентность вируса для кролика и снизилась вирулентность для других животных, а также для человека. Таким же путем вирус желтой лихорадки был превращен в вакцинный штамм путем длительных внутримозговых пассажей на мышах (штаммы Дакар и 17Д).
Заражение животных в течение длительного периода оставалось единственным методом культивирования вирусов. Это имело место до разработки новых методов их культивирования. Одним из таких методов явился метод культивирования вирусов на куриных эмбрионах. Использование данного метода позволило адаптировать к куриным эмбрионам высокоаттенуированный штамм 17Д вируса желтой лихорадки и начать широкое изготовление В. против этого заболевания. Метод культивирования на куриных эмбрионах позволил также получать вакцинные штаммы вирусов гриппа, паротита и других вирусов, патогенных для человека и животных.
Еще более существенные достижения в деле получения вакцинных штаммов вирусов стали возможны после открытия Эндерса, Уэллера и Роббинса (J. Enders, Т. Weller, F. Robbins, 1949), предложивших выращивать вирус полиомиелита в тканевых культурах, и введения в вирусологию однослойных клеточных культур и метода бляшек [Дульбекко и Фогт (R. Dulbecco, М. Vogt, 1954)]. Эти открытия позволили осуществить селекцию вариантов вирусов и получать чистые клоны - потомства одной или немногих вирусных частиц, обладающих определенными, наследственно закрепленными биол, свойствами. Сейбину (A. Sabin, 1954), использовавшему указанные методы, удалось получить мутанты вируса полиомиелита, характеризующиеся пониженной вирулентностью, и вывести вакцинные штаммы, пригодные для массового производства живой полиомиелитной вакцины. В 1954 г. те же методы были использованы для культивирования вируса кори, для получения вакцинного штамма этого вируса и затем для производства живой коревой В.
Метод клеточных культур с успехом используется как для получения новых вакцинных штаммов различных вирусов, так и для усовершенствования существующих.
Еще одним методом получения вакцинных штаммов вирусов является метод, основанный на применении рекомбинации (генетического скрещивания).
Так, напр., оказалось возможным получить рекомбинант, используемый как вакцинный штамм вируса гриппа А при взаимодействии авирулентного мутанта вируса гриппа, содержащего гемагглютинин H2 и нейраминидазу N2, и вирулентного штамма Гонконг, содержащего гемагглютинин H3 и нейраминидазу N2. Полученный рекомбинант содержал гемагглютинин H3 вирулентного вируса Гонконг и сохранил авирулентность мутанта.
Живые бактерийные, вирусные и риккетсиозные В. в последние 20- 25 лет наиболее широко изучаются и внедрены в противоэпидемическую практику в Советском Союзе. Применяются в практике живые В. против туберкулеза, бруцеллеза, туляремии, сибирской язвы, чумы, оспы, полиомиелита, кори, желтой лихорадки, гриппа, клещевого энцефалита, Ку-лихорадки, сыпного тифа. Изучаются живые В. против дизентерии, эпидемического паротита, холеры, брюшного тифа и некоторых других инфекционных болезней.
Методы применения живых В. разнообразны: подкожный (большинство В.), накожный или внутрикожный (В. против оспы, туляремии, чумы, бруцеллеза, сибирской язвы, БЦЖ), интраназальный (вакцина против гриппа); ингаляционный (вакцина против чумы); оральный или энтеральный (вакцина против полиомиелита, в стадии разработки - против дизентерии, брюшного тифа, чумы, некоторых вирусных инфекций). Живые В. при первичной иммунизации вводят однократно, за исключением В. против полиомиелита, где повторная вакцинация связана с введением вакцинных штаммов разных типов. В последние годы все шире изучается метод массовой вакцинации с помощью безыгольных (струйных) инъекторов (см. Инъектор безыгольный).
Основной ценностью живых В. является их высокая иммуногенность. При ряде инфекций, в первую очередь особо опасных (оспа, желтая лихорадка, чума, туляремия), живые В. являются единственным эффективным видом В., т. к. убитыми микробными телами или химическими В. не удается воспроизвести достаточно напряженного иммунитета против этих заболеваний. Реактогенность живых В. в целом не превышает реактогенности других прививочных препаратов. За время многолетнего широкого применения живых В. в СССР не наблюдалось случаев реверсии вирулентных свойств апробированных вакцинных штаммов.
К числу положительных качеств живых В. относятся также однократность их применения и возможность использования разнообразных способов аппликации.
К недостаткам живых В. следует отнести их относительно малую устойчивость при нарушении режима хранения. Эффективность живых В. определяется наличием в них живых вакцинных микробов, а естественное отмирание последних снижает активность В. Однако выпускаемые сухие живые В. при соблюдении температурного режима их хранения (не выше 8°) по срокам годности практически не уступают другим видам В. Недостатком некоторых живых В. (оспенная В., антирабическая) является возможность появления у отдельных привитых индивидуумов неврологических осложнений (см. Поствакцинальные осложнения). Эти поствакцинальные осложнения весьма редки, и их удается в значительной мере избежать при строгом соблюдении технологии приготовления и правил применения названных В.
Убитые вакцины
Убитые В. получают инактивацией патогенных бактерий и вирусов, применяя для этого различные воздействия на культуры физ. или хим. характера. Соответственно фактору, обеспечивающему инактивацию живых микробов, готовят гретые В., формалиновые, ацетоновые, спиртовые, феноловые. Изучаются также другие способы инактивации, напр, ультрафиолетовыми лучами, гамма-излучением, воздействием перекиси водорода и другими хим. агентами. Для получения убитых В. применяют высокопатогенные, полноценные в антигенном отношении штаммы соответствующих видов возбудителей.
По своей эффективности убитые В., как правило, уступают живым, однако некоторые из них имеют достаточно высокую иммуногенность, предохраняя привитых от заболевания или уменьшая тяжесть течения последнего.
Т. к. инактивация микробов упомянутыми выше воздействиями нередко сопровождается значительным снижением иммуногенности В. в связи с денатурацией антигенов, предпринимались многочисленные попытки применения щадящих способов инактивации с прогреванием микробных культур в присутствии сахарозы, молока, коллоидных сред. Однако полученные такими способами АД-вакцины, гала-вакцины и др., не показав существенных преимуществ, не вошли в практику.
В отличие от живых В., большинство которых применяется путем однократной прививки, убитые В. требуют двух или трех прививок. Так, напр., убитую брюшнотифозную В. вводят подкожно дважды с интервалом 25- 30 дней и третью, ревакцинирующую, инъекцию проводят через 6-9 мес. Вакцинацию против коклюша убитой В. проводят трехкратно, внутримышечно, с интервалом 30- 40 дней. Холерную В. вводят дважды.
В СССР применяют убитые В. против брюшного тифа и паратифа В, против холеры, коклюша, лептоспирозов и клещевого энцефалита. В зарубежной практике применяют также убитые В. против гриппа, полиомиелита.
Основным способом введения убитых В. являются подкожные или внутримышечные инъекции препарата. Изучаются методы энтеральной вакцинации против брюшного тифа и холеры.
Преимуществом убитых В. является относительная простота их приготовления, поскольку для этого не требуются специально и длительно изученные вакцинные штаммы, а также сравнительно большая стабильность при хранении. Существенным недостатком этих препаратов является слабая иммуногенность, необходимость повторных инъекций в курсе вакцинации, ограниченность способов аппликации В.
Химические вакцины
Химические В., применяемые для профилактики инфекционных болезней, не вполне соответствуют своему принятому в практике названию, т. к. не являются каким-либо химически определенным веществом. Эти препараты представляют собой антигены или группы антигенов, извлеченные из микробных культур тем или иным способом и в той или иной степени очищенные от балластных неиммунизирующих веществ. В одних случаях извлеченные антигены являются в основном бактерийными эндотоксинами (брюшнотифозная хим. В.), получаемыми обработкой культур способами, сходными с методом получения так наз. полных антигенов Буавена. Другие химические В. представляют собой «протективные антигены», продуцируемые нек-рыми микробами в процессе жизнедеятельности в организме животных или в специальных питательных средах при соответствующих режимах культивирования (напр., протективный антиген сибиреязвенных бацилл).
Из числа химических В. в СССР применяется брюшнотифозная В. в сочетании с хим. паратифозной В вакциной или со столбнячным анатоксином. Для вакцинации детских контингентов применяют другую хим. вакцину - Vi-антиген брюшнотифозных микробов (см. Vi-антиген).
В зарубежной практике имеет ограниченное применение для иммунизации некоторых профессиональных контингентов хим. сибиреязвенная В., представляющая собой протективный антиген сибиреязвенных бацилл, получаемый в специальных условиях культивирования и сорбированный на геле гидроокиси алюминия. Двукратное введение этой В. создает у привитых иммунитет длительностью 6-7 мес. Повторные ревакцинации приводят к выраженным аллергическим реакциям на прививки.
Применяют перечисленные В. для профилактики, т. е. для иммунизации здоровых людей с целью выработки ими иммунитета против того или иного заболевания (см. табл.). Некоторые В. применяют также при терапии хрон, инфекционных болезней с целью стимуляции выработки организмом более выраженного специфического иммунитета (см. Вакцинотерапия). Напр., при лечении хрон, бруцеллеза применяют убитую В. (в отличие от живой профилактической В.). М. С. Маргулис, в. д. Соловьев и А. К. Шубладзе предложили лечебную В. против множественного (рассеянного) склероза. Промежуточное положение между профилактическими и лечебными В. занимает антирабическая В., которую применяют для предупреждения заболевания бешенством лиц, зараженных и находящихся в инкубационном периоде. С лечебной целью применяют также аутовакцину (см.), приготовляемую путем инактивации культур микробов, выделенных от больного.
|
Исходный материал, принципы изготовления |
Способ применения |
Эффективность |
Реактогенность |
||
|---|---|---|---|---|---|
|
русское название |
|||||
|
Сухая антирабическая вакцина типа Ферми |
Vaccinum antirabicum siccum Fermi |
Фиксированный вирус бешенства, штамм «Москва», пассированный в мозге барана и инактивированный фенолом |
Подкожно |
Эффективна |
Умеренно реактогенна |
|
Инактивированная культуральная антирабическая вакцина Института полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР, сухая |
Vaccinum antirabicum inactivatum culturale |
Фиксированный вирус бешенства, штамм «Внуково-32», выращенный на первичной культуре ткани почек сирийского хомяка, инактивированный фенолом или ультрафиолетом |
Подкожно |
Эффективна |
Слабо реактогенна |
|
Бруцеллезная живая сухая вакцина |
Vaccinum brucellicum vivum (siccum) |
Агаровая культура вакцинного штамма Br. abortus 19-ВА, подвергнутая лиофилизации в сахарозожелатиновой среде |
Эффективна |
Слабо реактогенна |
|
|
Брюшнотифозная спиртовая вакцина, обогащенная Vi-антигеном |
Vaccinum typhosum spirituosum dodatum Vi-antigenum S.typhi |
Бульонная культура штамма Ту2 4446, убитая, обогащенная Vi-ан-тигсном |
Подкожно |
Эффективна |
Умеренно реактогенна |
|
Химическая сорбированная тифозно-паратифозно-столбнячная вакцина (TABte), жидкая |
Vaccinum typhoso-paratyphoso tetanicum chemicum adsorptum |
Смесь полных антигенов бульонных культур возбудителей брюшного тифа и паратифов А и В с фильтратом бульонной культуры С1, tetani, обезвреженной формалином и теплом |
Подкожно |
Эффективна |
Умеренно реактогенна |
|
Живая гриппозная вакцина для интраназального применения, сухая |
Vaccinum gripposum vivum |
Аттенуированные вакцинные штаммы вируса гриппа А2, В, выращенные в куриных эмбрионах |
Интраназально |
Умеренно эффективна |
Слабо реактогенна |
|
Живая гриппозная вакцина для перорального введения, сухая |
Vaccinum gripposum vivum perorale |
Аттенуированные вакцинные штаммы вируса гриппа А2, В, выращенные на культуре клеток почек куриных эмбрионов |
Перорально |
Умеренно эффективна |
Ареактогенна |
|
Очищенный дифтерийный анатоксин, адсорбированный на гидроокиси алюминия (АД-анатоксин) |
Anatoxinum diphthericum purificatum aluminii hydroxydo adsorptum |
Фильтрат бульонной культуры Corynebacterium diphtheriae PW-8, обезвреженный формалином и теплом и сорбированный на гидроокиси алюминия |
Подкожно |
Высокоэффективен |
Слабо реактогенен |
|
Очищенный дифтерийностолбнячный анатоксин, адсорбированный на гидроокиси алюминия (АДС-анатоксин) |
Anatoxinum diphthericotetanicum (purificatum aluminii hydroxydo adsorptum) |
Фильтрат бульонных культур Corynebacterium diphtheriae PW-8 и С1, tetani, обезвреженный формалином и теплом и сорбированный на гидроокиси алюминия |
Подкожно |
Высокоэффективен |
Слабо реактогенен |
|
Адсорбированная коклюшно-дифтерийностолбнячная вакцина (АКДС-вакцина) |
Vaccinum pertussico-diphthericotetanicum aluminii hydroxydo adsorptum |
Смесь культур не менее 3 коклюшных штаммов основных серотипов, убитых формалином или мертиолятом, и фильтратов бульонных культур Corynebacterium diphtheriae PW-8, и Cl. tetani, обезвреженных формалином |
Подкожно или внутримышечно |
Высокоэффективна в отношении дифтерии и столбняка, эффективна в отношении коклюша |
Умеренно реактогенна |
|
Вакцина коревая живая, сухая |
Vaccinum morbillorum vivum |
Аттенуированный вакцинный штамм «Ленинград-16», выращенный на культуре клеток почек новорожденных морских свинок (ПМС) или культуре клеток эмбрионов японских перепелок (ФЭП) |
Подкожно или внутрикожно |
Высокоэффективна |
Умеренно реактогенна |
|
Инактивированная культуральная вакцина против клещевого энцефалита человека, жидкая или сухая |
Vaccinum culturale inactivatum contra encephalitidem ixodicam hominis |
Штаммы «Пан» и «Софьин», культивируемые на клетках куриных эмбрионов и инактивированные формалином |
Подкожно |
Эффективна |
Слабо реактогенна |
|
Лептоспирозная вакцина, жидкая |
Vaccinum leptospirosum |
Культуры не менее 4 серотипов патогенных лептоспир, выращенные на диет, воде с добавлением сыворотки кролика и убитые нагреванием |
Подкожно |
Эффективна |
Умеренно реактогенна |
|
Оспенная вакцина, сухая |
Vaccinum variolae |
Аттенуированные штаммы Б-51, Л-ИВП, ЭМ-63, культивируемые на коже телят |
Накожно и внутрикожно |
Высокоэффективна |
Умеренно реактогенна |
|
Полиомиелитная пероральная живая вакцина типов I, II, III |
Vaccinum poliomyelitidis vivum perorale, typus I, II, III |
Аттенуированные штаммы Сейбина I, II, III типов, культивируемые на первичной культуре клеток почки зеленой мартышки. Вакцина выпускается как в жидкой форме, так и в форме конфет-драже (антиполиодраже) |
Перорально |
Высокоэффективна |
Ареактогенна |
|
Сибиреязвенная живая сухая вакцина (СТИ) |
Vaccinum anthracicum STI (siccum) |
Агаровая споровая культура вакцинного бескапсульного штамма СТИ-1, лиофилизированная без стабилизатора |
Накожно или подкожно |
Эффективна |
Слабо реактогенна |
|
Очищенный столбнячный анатоксин, адсорбированный на гидроокиси алюминия (АС-анатоксин) |
Anatoxinum tetanicum purificatum aluminii hydroxydo adsorptum |
Фильтрат бульонной культуры С1, tetani, обезвреженный формалином и теплом и сорбированный на гидроокиси алюминия |
Подкожно |
Высокоэффективен |
Слабо реактогенен |
|
Анатоксин стафилококковый очищенный адсорбированный |
Anatoxinum staphylococcicum purificatum adsorptum |
Фильтрат бульонной культуры токсигенных штаммов стафилококка 0-15 и ВУД-46, обезвреженный формалином и сорбированный на гидроокиси алюминия |
Подкожно |
Эффективен |
Слабо реактогенен |
|
Сухая живая комбинированная сыпнотифозная вакцина Ε (сухая ЖКСВ-Е) |
Vaccinum combinatum vivum (siccum) E contra typhum exanthematicum |
Смесь аттенуированного вакцинного штамма риккетсий Провацека (Мадрид-Е), культивируемого в желточном мешке куриного эмбриона и растворимого антигена риккетсий Провацека штамма «Брейнль» |
Подкожно |
Эффективна |
Умеренно реактогенна |
|
Туберкулезная сухая вакцина БЦЖ для внутрикожного применения |
Vaccinum BCG ad usum intracutaneum (siccum) |
Культура вакцинного штамма БЦЖ, выращенная на синтетической среде и лиофилизированная |
Внутрикожно |
Высокоэффективна |
Умеренно реактогенна |
|
Холерная вакцина |
Vaccinum cholericum |
Агаровые культуры холерного вибриона и «Эль-Тор», серотипов «Инаба» и «Огава», убитые нагреванием или формалином. Вакцина выпускается в жидком или сухом виде |
Подкожно |
Слабо эффективна |
Умеренно реактогенна |
|
Туляремийная живая сухая вакцина |
Vaccinum tularemicum vivum siccum |
Агаровая культура вакцинного штамма № 15 Гайского линии НИИЭГ, лиофилизированная в Саха розо-желатиновой среде |
Накожно или внутрикожно |
Высокоэффективна |
Слабо реактогенна |
|
Чумная живая сухая вакцина |
Vaccinum pestis vivum siccum |
Агаровая или бульонная культура вакцинного штамма ЕВ линии НИИЭГ, лиофилизированная в сахарозо-желатиновой среде |
Подкожно или накожно |
Эффективна |
Умеренно или слабо реактогенна в зависимости от способа введения |
Методы приготовления
Методы приготовления В. разнообразны и определяются как биол, особенностями микробов и вирусов, из которых готовят В., так и уровнем технической оснащенности вакцинного производства, к-рое все в большей степени приобретает промышленный характер.
Бактерийные В. готовят путем выращивания соответствующих штаммов на различных, специально подобранных, жидких пли плотных (агаровых) питательных средах. Анаэробные микробы - продуценты токсинов, выращиваются в соответствующих условиях. В технологии производства многих бактерийных В. все больше отходят от лабораторных условий культивирования в стеклянных емкостях, используя большого объема реакторы и культиваторы, позволяющие одновременно получать микробную массу на тысячи и десятки тысяч прививочных доз вакцины. В значительной степени механизируются способы концентрации, очистки и другие приемы обработки микробной массы. Все живые бактериальные В. в СССР выпускают в форме лиофилизированных препаратов, высушенных из замороженного состояния в глубоком вакууме.
Риккетсиозные живые В. против Ку-лихорадки и сыпного тифа получают путем культивирования соответствующих вакцинных штаммов в развивающихся куриных эмбрионах с последующей обработкой полученных взвесей желточных мешков и лиофилизацией препарата.
Вирусные вакцины готовятся при использовании следующих методов: Производство вирусных вакцин на первичных клеточных культурах почечной ткани животных. В различных странах используют для производства вирусных В. культуры трипсинизированных почечных клеток обезьян (полиомиелитные В.), морских свинок и собак (В. против кори, краснухи и некоторых других вирусных инфекций), сирийских хомяков (антирабическая В.).
Производство вирусных вакцин на субстратах птичьего происхождения. На производстве ряда вирусных В. успешно используются куриные эмбрионы и их клеточные культуры. Так, на куриных эмбрионах или в клеточных культурах куриных эмбрионов готовят В. против гриппа, паротита, оспы, желтой лихорадки, кори, краснули, клещевого и японского энцефалитов и другие В., используемые в ветеринарной практике. Для производства некоторых вирусных В. пригодны также эмбрионы и тканевые культуры иных птиц (напр., перепелок и уток).
Производство вирусных вакцин на животных. Примерами являются производство оспенной В. (на телятах) и производство антирабической В. (на овцах и сосунках белых крыс).
Производство вирусных вакцин на диплоидных клетках человека. В ряде стран на производстве вирусных В. (против полиомиелита, кори, краснухи, оспы, бешенства и некоторых других вирусных инфекций) применяется штамм WI-38 диплоидных клеток, полученных из легочной ткани эмбриона человека. Основными преимуществами использования диплоидных клеток являются: 1) широкий спектр чувствительности этих клеток к различным вирусам; 2) экономичность производства вирусных В.; 3) отсутствие в них посторонних побочных вирусов и других микроорганизмов; 4) стандартность и стабильность клеточных линий.
Усилия исследователей направлены на выведение новых штаммов диплоидных клеток, в т. ч. пропс-ходящих из тканей животных, с целью дальнейшей разработки и внедрения в широкую практику доступных, безопасных и экономичных методов производства вирусных В.
Следует особо подчеркнуть, что любая В., предложенная для широкого применения, должна удовлетворять требованиям к частоте и тяжести побочных реакций и осложнений, связанных с вакцинацией. Важность этих требований признается ВОЗ, к-рая проводит совещания экспертов, формулирующих все требования к биол, препаратам и подчеркивающих, что безопасность препарата - главное условие при разработке В.
Производство В. в СССР сосредоточено преимущественно в крупных ин-тах вакцин и сывороток.
Качество В., выпускаемых в СССР, находится под контролем как местных контрольных органов при институтах-изготовителях. так и Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биол, препаратов им. Л. А. Тарасевича. Технология производства и контроль, а также методы применения В. регламентируются Комитетом вакцин и сывороток М3 СССР. Большое внимание уделяется стандартизации выпускаемых для практического применения В.
Вновь разрабатываемые и предлагаемые для практики В. проходят разностороннюю апробацию в Государственном институте им. Тарасевича, материалы испытаний рассматриваются Комитетом вакцин и сывороток, а при внедрении новых В. в практику соответствующая документация на них утверждается М3 СССР.
Помимо разностороннего изучения новых В. в экспериментах на животных, после установления безвредности препарата его изучают в отношении реактогенности и иммунологической эффективности в ограниченном опыте иммунизации людей. Иммунологическую эффективность В. оценивают по серологическим изменениям и кожным аллергическим пробам, наступающим у привитых людей в определенные сроки наблюдений. Следует, однако, учитывать, что эти показатели далеко не во всех случаях могут служить критериями действительной иммуногенности В., т. е. ее способности защитить привитого от заболевания соответствующей инфекционной болезнью. Поэтому глубокому и тщательному изучению подлежат коррелятивные связи между серо-аллергическими показателями у вакцинированных и наличием действительного поствакцинального иммунитета, выявляемого в опытах на животных. В создании отечественных оригинальных В. большое значение имели работы М. А. Морозова, Л. А. Тарасевича, H. Н. Гинсбурга, Н.Н. Жукова-Вережникова, Н. А. Гайского и Б. Я. Эльберта, П. А. Вершиловой, П. Ф. Здродовского, А. А. Смородинцева, В. Д. Соловьева, М. П. Чумакова, О. Г. Анджапаридзе и др.
Библиография: Безденежных И. С. и др. Практическая иммунология, М., 1969; Гинсбург H. Н. Живые вакцины (История, элементы теории, практика), М., 1969; Здродовский П. Ф. Проблемы инфекции, иммунитета и аллергии, М., 1969, библиогр.; Кравченко А. Т., Салтыков Р. А. и Резепов Ф. Ф. Практическое руководство по применению биологических препаратов, М., 1968, библиогр.; Методическое руководство по лабораторной оценке качества бактерийных и вирусных препаратов (Вакцины, анатоксины, сыворотки, бактериофаги и аллергены), под ред. С. Г. Дзагурова и др., М., 1972; Профилактика инфекций живыми вакцинами, под ред. М. И. Соколова, М., 1960, библиогр.; Рогозин И. И. и Беляков В. Д. Ассоциированная иммунизация и экстренная профилактика, Д., 1968, библиогр.
В. М. Жданов, С. Г. Дзагуров, Р. А. Салтыков.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Вакцина чумная живая ФС.3.3.1.0022.15
В замен ГФ Х, ст. 713
ФС 42-3877-99
Настоящая фармакопейная статья распространяется на вакцину чумную живую, лиофилизат для приготовления суспензии для инъекций, накожного скарификационного нанесения и ингаляций, представляющую собой живую культуру вакцинного штамма чумного микроба Yersinia pestis EV линии НИИЭГ, высушенную методом лиофилизации в стабилизирующей среде.
Вакцина предназначена для профилактики чумы и вызывает развитие специфического иммунитета продолжительностью до 1 года.
ПРОИЗВОДСТВО
Вакцинный штамм Y . pestis EV линии НИИЭГ должен обладать типичными морфологическими, культуральными и биохимическими свойствами; содержать плазмиды pFra, пестициногенности (pPst) и кальций-зависимости (pCad) с молекулярными массами » 60 , » 6 и » 47 MDa соответственно; не должен вызывать гибель морских свинок и потерю их массы при введении в дозе 15 10 9 микробных клеток (м.к.). Иммуногенность штамма по величине ЕD 50 при подкожном введении не должна превышать для морских свинок 10 3 м.к., для белых мышей – 10 4 м.к.
Перед приготовлением очередной серии вакцинного штамма Y . pestis EV линии НИИЭГ проводят его пассаж через организм морской свинки с последующим отбором типичных колоний, выросших на чашках Петри с агаром Хоттингера из посевов селезенки и регионарных лимфатических узлов.
Технология изготовления вакцины предусматривает получение посевных культур Y . pestis EV линии НИИЭГ I, II и III генераций; процесс накопления биомассы, выращенной для приготовления вакцинной взвеси с необходимой концентрацией; последующий розлив, замораживание, сублимационное высушивание, герметизацию и упаковку препарата. На стадиях приготовления посевных культур определяют рН, концентрацию микробных клеток и отсутствие посторонней микрофлоры.
В зависимости от технологии приготовления вакцины в процессе производства используются вспомогательные вещества, разрешенные для использования при производстве иммунобиологических лекарственных препаратов: сахароза, желатин, тиомочевина, декстрин, аскорбиновая кислота.
ИСПЫТАНИЯ
Описание
Пористая масса серовато-белого цвета.
Подлинность
Вакцина должна содержать чистую культуру вакцинного штамма Y . pestis EV линии НИИЭГ. Определение проводят иммунофлуоресцентным методом с помощью иммуноглобулинов чумных диагностических флуоресцирующих, в соответствии с инструкцией по применению. В мазках из препарата микробные клетки должны светиться по периферии ярко-зеленым цветом.
Время растворения
Должна полностью растворяться в течение 3 мин при добавлении 1,8 мл 0,9 % раствора натрия хлорида.
Восстановленный препарат – гомогенная суспензия серовато-белого цвета без посторонних примесей и хлопьев. Определение проводят визуально.
Время седиментационной устойчивости
Суспензия не должна расслаиваться в течение 5 мин. Определение проводят в соответствии с .
Размер частиц
Суспензия должна свободно проходить в шприц через иглу № 0840. Определение проводят в соответствии с .
рН
От 6,8 до 7,8. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с . Для испытания используют 5 образцов.
Потеря в массе при высушивании
Не более 4,0 %. Определение проводят гравиметрическим методом в соответствии с . Для испытания используют 5 образцов.
Средняя масса и отклонение от средней массы
Коэффициент вариации массы вакцины в ампулах (флаконах) должен быть не более 5 %. Определение проводят в соответствии с .
Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов
Вакцина не должна содержать посторонних микроорганизмов и грибов. Определение проводят в соответствии с методом прямого посева на тиогликолевую среду.
В ампулу (флакон) с вакциной вносят 2 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. По 1 мл каждого образца полученной взвеси засевают в пробирки, содержащие по 20 мл тиогликолевой среды. Одну пробирку из каждого образца инкубируют при температуре от 30 до 35 о С для выявления аэробных и анаэробных микроорганизмов, другую — при температуре от 20 до 25 о С для выявления грибов. Через 5 – 7 сут из каждой пробирки производят пересев по 0,5 мл в 2 пробирки, содержащие по 10 мл тиогликолевой среды, и инкубируют при указанных выше температурах. Через 14 сут выращивания со дня первичного посева из всех пробирок делают мазки, окрашивают их по Граму, просматривают под микроскопом при увеличении К7×40.
В случае обнаружения хотя бы в одном из 10 просмотренных полей зрения кокков или грамположительных палочек препарат считается контаминированным посторонней микрофлорой.
При выявлении в мазках грамотрицательных палочек, отличающихся по морфологии от чумного микроба, готовят мазки, которые окрашивают иммуноглобулинами чумными диагностическими флуоресцирующими в соответствии с инструкцией по применению и просматривают в каждом мазке не менее 10 полей с помощью люминесцентного микроскопа. Если не все бактерии, обнаруживаемые в вакцине, дают специфическое ярко-зеленое свечение по периферии клеток, препарат считают не выдержавшим испытание.
Специфическая безопасность
Вакцина должна быть безопасной. Испытание проводят на морской свинке массой (275 ± 25) г.
Содержимое ампулы (флакона) растворяют в 1,8 мл 0,9 % раствора натрия хлорида, определяют концентрацию по методике, описанной в разделе «Специфическая активность (концентрация микробных клеток)», разводят 0,9 % раствором натрия хлорида до концентрации 15 · 10 9 м.к./мл и вводят подкожно в объеме 1 мл одной морской свинке во внутреннюю поверхность бедра.
На 6 сут морскую свинку взвешивают, подвергают эвтаназии, отмечают патологоанатомические изменения, обнаруживаемые при вскрытии. Печень, селезенку, легкие, регионарные лимфатические узлы, кровь и ткани из места введения высевают методом отпечатков на чашку Петри с агаром Хоттингера, рН (7,2 ± 0,1), с добавлением натрия сернистокислого 0,25 г на 1 л среды и на чашку Петри с агаром Хоттингера, рН (7,2 ± 0,1), с добавлением генцианвиолета 0,05 г на 1 л среды. Посевы инкубируют при температуре (27 ± 1) о С в течение 3 сут.
Вакцина не должна вызывать у морской свинки потерю массы к 6 сут после введения больше чем на 20 %, не должна вызывать видимых патологоанатомических изменений в легких — кровоизлияний, очагов воспаления, гранулем, абсцессов; в посевах крови и легких не должно быть роста чумного микроба. В месте введения допускается развитие кровоизлияния и инфильтрата подкожной клетчатки, переходящих в некроз. Во внутренних органах (селезенка и печень) допустимо развитие ограниченной узелковой реакции.
Специфическая активность
- Концентрация микробных клеток . В препарате должно содержаться от 5 · 10 10 до 10 11 м.к. в 1 мл. Определение проводят в 3 образцах для каждой серии. Колебания результатов определений в отдельных образцах не должны превышать 5 % от средней арифметической величины.
Содержимое ампулы (флакона) растворяют в 1,8 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. В стандартную пробирку вносят 0,1 мл разведенного препарата и добавляют 0,9 % раствор натрия хлорида до достижения концентрации стандартного образца (СО) мутности (10 МЕ). Объем 0,9 % раствора натрия хлорида, использованный при разведении, учитывают при расчете концентрации микробных клеток (ОК) по формуле:
ОК = (0,1 + n ) ·10,
0,1 – объем растворенной вакцины, мл;
n – объем 0,9 % раствора натрия хлорида, использованный при разведении пробы, мл;
10 – постоянная величина.
- Количество живых микробных клеток . Количество живых микробных клеток должно составлять не менее 25 % от общего количества микробных клеток. Колебания результатов определения в отдельных образцах не должны превышать 20 % от средней арифметической величины.
При определении количества живых микробных клеток в вакцине используют концевые химически чистые пипетки и пробирки с 0,9 % раствором натрия хлорида, которые должны быть охлаждены до температуры от 2 до 8 о С.
Для определения количества живых микробных клеток из приготовленных ранее образцов взвесей вакцины делают последовательные десятикратные разведения от 10 -1 до 10 -8 , используя для каждого разведения отдельную пипетку вместимостью 1 мл. Из пробирок с разведениями 10 -7 и 10 -8 высевают пипеткой по 0,1 мл взвеси на 2 чашки Петри с питательной средой для выделения и культивирования чумного микроба или с агаром Хоттингера со стимулятором роста (кровь гемолизированная до 1 % концентрации) или натрий сернистокислый (0,25 г на 1 л среды).
Через 72 – 96 ч инкубации при температуре (27 ± 1) о С подсчитывают количество колоний для каждого образца, принимая за 100 % количество микробных клеток, высеянных, исходя из показателя общей концентрации микробных клеток для данного образца, определенной с помощью СО мутности (10 МЕ). За количество жизнеспособных микробных клеток для каждой серии принимают среднее арифметическое определений для 3 ампул (флаконов).
Исходя из количества жизнеспособных микробных клеток в ампуле (флаконе) с вакциной рассчитывают количество доз и объем растворителя каждой серии для приготовления суспензии для инъекций, накожного скарификационного нанесения и ингаляций.
Для достоверности полученных результатов параллельно используют стандартный образец вакцины чумной живой.
- Иммуногенность . ЕD 50 вакцины для морских свинок не должна превышать 10 4 , для белых мышей — 4 ·10 4 живых микробных клеток. Испытание проводят на морских свинках массой (275 ± 25) г и на белых нелинейных мышах массой (19 ± 1) г. Вакцину разводят с таким расчетом, чтобы в 1 мл содержалось 10 9 живых м.к. Исходя из заранее определенного количества живых м.к., вакцину разводят для иммунизации морских свинок до концентраций 2 · 10 5 ; 4 · 10 4 ; 8 · 10 3 и 16 · 10 2 м.к./мл; белых мышей — до концентраций 5 · 10 5 ; 1 · 10 5 ; 2 · 10 4 и 4 ·10 3 м.к./мл. Каждую дозу препарата вводят однократно 6 животным. Морских свинок иммунизируют подкожно во внутреннюю поверхность левого бедра в объеме 0,5 мл; белых мышей – в объеме 0,2 мл дозами 8 · 10 2 , 4 · 10 3 , 2 · 10 4 и 1 ·10 5 живых м.к.
Для определения фактического содержания живых микробных клеток в иммунизирующих дозах взвесь, содержащую 8 ·10 3 м.к./мл, используемую при иммунизации морских свинок, или дозу 4 · 10 3 м.к./мл для иммунизации белых мышей, разводят до концентрации 10 3 м.к./мл. По 0,1 мл взвеси с концентрацией 10 3 м.к./мл (100 м.к.) высевают на 3 чашки Петри с одной из вышеперечисленных питательных сред и инкубируют при температуре (27 ± 1) о С в течение 48 ч. Количество выросших колоний на чашках учитывают при вычислении ЕD 50 испытуемой серии.
Подкожное заражение морских свинок проводят во внутреннюю поверхность правого бедра на 21 сут, мышей – в ту же область на 7 или 21 сут после иммунизации. Заражающая доза для иммунизированных вакциной животных составляет 200 Dcl (Dosis certa letalis = LD 100) вирулентного штамма чумного микроба, 1 Dcl которого не должна превышать 100 микробных клеток.
Подготовка заражающего штамма Y . pestis 231 должна быть указана в нормативной документации.
Для заражения неиммунизированных (контрольных) животных используют взвесь с концентрацией 50 м.к./мл в объеме 0,5 мл для морских свинок и 125 м.к./мл в объеме 0,2 мл для белых мышей, что соответствует 1 Dcl.
Для определения фактического содержания микробных клеток заражающего штамма по 0,1 мл взвеси культуры Y . pestis 231, содержащей 10 3 м.к./мл, высевают на 3 чашки Петри с агаром Хоттингера и равномерно распределяют по всей поверхности среды методом «обкатки» чашек. Посевы инкубируют при температуре (27 ± 1) ºС в течение 48 ч, после чего подсчитывают количество выросших колоний.
Наблюдение за зараженными животными ведут в течение 20 сут. Все контрольные животные должны погибнуть от чумы в течение 10 сут. Погибших животных вскрывают, берут органы и ткани (у морских свинок берут пробы из места введения, регионарных паховых лимфатических узлов, печени, селезенки, легких, верхушки сердца; у белых мышей – из селезенки), высевая их методом отпечатков на чашки Петри с агаром Хоттингера с добавлением генцианвиолета и с агаром Хоттингера — с натрием сернистокислым. Чашки Петри инкубируют при температуре (27 ± 1) ºС. Учет результатов проводят через 24 — 48 ч.
Павшими от чумы считают только тех животных, из органов которых при высеве выделяется культура Y . pestis .
ЕD 50 вычисляют по формуле:
lg ED 50 = lg D N – S · (∑L i – 0,5),
lg D N – логарифм максимальной иммунизирующей (фактической) дозы;
S – логарифм кратности разведений;
L i — отношение количества животных, выживших при иммунизации данной дозой, к общему количеству животных, которым эта доза была введена;
∑L i — сумма значений L i , найденных для всех испытанных доз.
Если все контрольные животные выжили, или значение ЕD 50 будет более допустимого, контроль повторяют на таком же количестве животных. Если при повторном испытании значение ЕD 50 будет выше допустимого, препарат считают не выдержавшим испытание.
Термостабильность
Не менее 4 сут. Показатель термостабильности (срок, в течение которого в препарате сохраняется 50 % живых микробных клеток по отношению к первоначальному количеству) определяют в 3 образцах после хранения вакцины при температуре (37 ± 1) о С в течение 14 сут.
Методика определения количества живых микробных клеток изложена в разделе «Специфическая активность». Показатель термостабильности (t ) в сут рассчитывают по формуле:
lg A 0 – логарифм первоначального количества живых м.к./мл;
lg A n – логарифм количества живых м.к./мл через 14 сут хранения вакцины при температуре (37 ± 1) °C;
0,3 – постоянная величина;
14 – срок хранения вакцины при температуре (37 ± 1) °C, сут.
Очаги чумы располагаются там, где обитают грызуны - носители инфекции. Болезнь характеризуется распространением в Центральной Азии, Африке, Северной и Южной Америке. В XX веке эпидемия чумы регистрировалась в Индии. В 1898-1963 годах в этой стране умерло от чумы 12 662,1 тыс. человек.
Ежегодно число заболевших чумой составляет около 2,5 тысячи человек без тенденции к снижению. По информации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) с 1989 по 2004 год было зафиксировано около сорока тысяч случаев в 24 странах. Летальность составила 7% от числа заболевших. Плановая профилактика - необходимая мера для борьбы с недугом.
Чума: заражение, формы, симптомы и лечение
Чума — острое природно-очаговое заболевание, протекающее с исключительно тяжёлым общим состоянием. Оно характеризуется высокой летальностью заразностью. Источник инфекции - грызуны, при легочной форме - люди. Заражение происходит трансмиссивным путем (через кровь) при укусах блох. Выделяют кожную, бубонную, легочную и септическую форму.
Основные симптомы недуга:
- Лихорадка.
- Увеличение лимфоузлов.
- Поражение легких и других внутренних органов.
- Мышечные боли.
- Падение артериального давления и увеличение числа сердечных сокращений.
- Резкая слабость.
- Спутанность сознания до его потери.
Больных чумой лечат в стационаре. Выбор препаратов зависит от формы заболевания. Курс терапии антибиотиками составляет 7-10 дней. Применяют Ко-тримоксазол, Левомицетин, Стрептомицин, Тетрациклин. Также назначают массивную дезинтоксикацию (Альбумин, Гемодез, Реополиглюкин) и форсированный диурез (Фуросемид, Маннитол). В качестве симптоматической терапии используют жаропонижающие, сосудистые препараты.
Кто изобрел вакцину от чумы
Впервые вакцину, эффективную против бубонной формы, создал в начале XX века Владимир Хавкин из убитых температурой чумных палочек. Более эффективными являются препараты, полученные из живых штаммов с использованием бактериофагов. Впервые такую вакцину создала и испытала на себе в 1934 году Покровская Магдалина Петровна.
Характеристика вакцины
Вакцина чумная живая выпускается в виде однородного белого порошка во флаконах по 2 мл.
Состав подано в таблице ниже.
Действующее вещество:
Стабилизатор:
Наполнитель:
Микробные клетки под химическим воздействием потеряли вирулентность (способность вызывать заболевание). При этом сохранилась способность к размножению в месте введения, лимфатических узлах и внутренних органах. Вакцинная инфекция не сопровождается клинической картиной заболевания, но приводит к формированию иммунитета к патогенным штаммам. При повторной встрече с возбудителем организм уже имеет необходимый уровень защитных антител. Сформированный иммунитет сохраняется до года.
Показания для введения вакцины
Препарат назначается для активной профилактики чумы с 2-х лет.
В особенности применение показано:
- Лаборантам, работающим с живыми культурами возбудителя чумы, с зараженными животными или производящим исследования материалов.
- Ветеринарам и работникам, производящим убой грызунов, транспортировку, переработку и реализацию сырья.
- Лицам, выполняющим заготовительные, промышленные, геологические, экспедиционные, пастбищно-мелиоративные, изыскательные работы.
- Людям, проживающим на энзоотичной по чуме территории.
Способ применения вакцины и дозы
Существует четыре способа введения вакцины, описанные в таблице ниже.
|
Способ введения |
Техника выполнения |
|
Накожный |
Место вакцинации: внутренняя поверхность предплечья. На кожу наносят по одной капле вакцины. Через каждую из них проводят по 8 линейных поверхностных штрихов в крестообразном направлении. После этого препарат на протяжении нескольких секунд интенсивно втирают. Прививочная доза составляет 0,15 мл |
|
Подкожный |
Место прививания - нижний угол лопатки. 0,5 мл вакцины вводится строго подкожным методом |
|
Подкожный безыгольный |
В этом случае используется специальный инъектор, который предварительно стерилизуется. Одна прививочная доза составляет 0,5 мл. Объем препарата варьирует в зависимости от возраста пациента. Инъекция проводится только в область дельтовидной мышцы |
|
Внутрикожный |
Прививочная доза - 0,1 мл |
Противопоказания для введения вакцины
Противопоказания:
- Острые инфекционные заболевания.
- Заболевания сердечно-сосудистой системы (пороки, аномалии развития).
- Язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки.
- Заболевания почек, печени.
- Сахарный диабет.
- Болезни крови и лимфоидной системы.
- Вторая половина беременности.
- Бронхиальная астма.
Важно! После перенесения острых заболеваний прививки должны проводиться не ранее чем через месяц после клинического выздоровления. Перенесшим инфекционный гепатит, менингококковую инфекцию - через 6 месяцев
Побочное действие вакцины
Прививки вакциной могут сопровождаться как местными, так и общими реакциями.
В месте инъекции возникают:
- Слабовыраженная гиперемия.
- Умеренная болезненность.
- Отек и припухлость.
Системные проявления:
- Головная боль и недомогание.
- Незначительное повышение температуры тела.
- Мелкая кожная сыпь.
- Покраснение кожи.
К патологическим реакциям, которые являются опасными для жизни относятся:
- Лимфаденит - воспаление регионарных лимфатических узлов.
- Длительное повышение температуры тела выше 38 градусов по Цельсию.
- Крапивница, отек Квинке, анафилактический шок.
Совет врача! Для предупреждения развития аллергических реакций первые полчаса после прививки следует оставаться под присмотром медицинских работников
Применение вакцины
Взрослым прививку вводят однократно. Она обеспечивает иммунитет длительностью до года. Ревакцинация проводится через 12 месяцев или по эпидемическим показаниям.
Запрещается введение препарата беременным и кормящим женщинам. Вакцина оказывает тератогенное действие (приводит к аномалиям развития, врожденным уродствам и внутриутробному инфицированию).
График прививания в детском возрасте, подано ниже в таблице.
За и против введения препарата
Доктора поддерживают идею плановой вакцинации, благодаря которой уменьшилась массовость заражения чумой. В последнее десятилетие наблюдаются редкие вспышки заболеваемости. Инфекция не представляет мировой опасности.
Препарат хорошо переносится организмом, редко возникают побочные реакции после введения, в то время как сама болезнь заканчивается летально.
Взаимодействие с другими средствами для иммунопрофилактики
Допускается одновременная внутрикожная вакцинация взрослых против чумы, бруцеллеза и туляремии на разных участках наружной поверхности верхней трети плеча.
Препарат чувствительный к антибиотикам, в связи с чем прививание на фоне терапии не допускается.
Иммунизацию взрослого населения проводят не ранее чем через месяц, детей — не ранее чем через 2 месяца после прививки другими вакцинами. Вакцинацию взрослых другими препаратами можно проводить не ранее чем через месяц, а детей — не ранее, чем через 2 месяца.
Условия хранения вакцины
Правила хранения вакцины следующие:
- Температура от минус 2 до плюс 6 градусов по Цельсию.
- Запрещено замораживать ампулы с вакциной.
- При комнатной температуре от плюс 2 до 5 градусов срок хранения составляет 2 месяца.
- Перед открытием стоит проверить целостность упаковки и маркировки.
- По истечению срока годности (24 месяца) препарат подлежит утилизации.
Вакцина от чумы для собак
Для профилактики вирусных инфекционных заболеваний собакам делают прививки. Эти животные - источник инфекции для человека.
Основные правила проведения вакцинации собак:
- Прививку можно делать только здоровому псу, которому была проведена дегельминтизация за 1-2 недели до запланированной вакцинации.
- После инъекции нужно соблюдать карантинный режим: щенка не переутомлять, не простуживать и не купать.
- Делать прививки только с соблюдением срока годности, правил хранения вакцин и дозировок.
ЭПМ - препарат для иммунизации собак (фото: www.zoofarmagro.md)
Существуют моновалентные (против одного заболевания) и поливалентные (против нескольких заболеваний сразу) вакцины. В нашей стране применяются три противочумных препарата: "Вакчум", 668-КФ и ЭПМ. Вакцина ЭПМ имеет один существенный недостаток - ее можно прививать животным не моложе 3-х месяцев. Поэтому при иммунизации щенков лучше пользоваться двумя другими средствами.
Аналоги вакцины
Аналоги вакцины сходны по составу основного действующего вещества и механизму действия. Отличия заключаются в степени очистки вакцины, подбору вспомогательных компонентов и способе введения.
Перечень официально зарегистрированных аналогов:
- Вакцина для профилактики чумы (Vaccine plague).
- Вакцина чумная живая.
Индивидуальный подбор препарата стоит осуществлять вместе с лечащим врачом в соответствии с показаниями и состоянием организма.
Со времен первых эпидемий чумы врачи-практики спорили о том, можно заразиться чумой от больного или нет и если можно, то каким способом. Мнения высказывались противоречивые. С одной стороны, утверждалось, что прикосновение к больным и их вещам опасно. С другой стороны, близость к больным, нахождение на инфицированной территории считались безопасными. Ясного ответа не было, поскольку втирание гноя больного в кожу или ношение его одежды далеко не всегда приводило к заражению.
Многие врачи усматривали связь между чумой и малярией. Первый опыт по самозаражению чумой провел в городе Александрия в 1802 году английский врач А. Уайт. Он хотел доказать, что чума может вызвать приступ малярии. Уайт извлек гнойное содержимое бубона чумной больной и втер себе в левое бедро. Даже когда на его собственном бедре появился карбункул и лимфатические узлы начали увеличиваться, врач продолжал утверждать, что заболел малярией. Лишь на восьмой день, когда симптомы стали очевидными, он поставил себе диагноз чумы и был доставлен в госпиталь, где и скончался.
Сейчас понятно, что от человека к человеку чума передается в основном воздушно-капельным путем, поэтому больные, особенно легочной формой чумы, представляют огромную опасность для окружающих. Также возбудитель чумы может проникнуть в организм человека через кровь, кожу и слизистые оболочки. Хотя причина болезни долгое время оставалась невыясненной, врачи давно искали способы защиты страшного заболевания. Задолго до начала эры антибиотиков, с помощью которых сегодня чуму довольно успешно вылечивают, и вакцинопрофилактики они предлагали различные способы повышения устойчивости организма к чуме.
Трагически закончился эксперимент, проделанный в 1817 году австрийским врачом А. Розенфельдом. Он уверял, что снадобье, приготовленное из костного порошка и высушенных лимфатических желез, взятых из останков умерших от чумы, при приеме внутрь полностью защищает от болезни. В одном из госпиталей Константинополя Розенфельд заперся в палате с двадцатью больными чумой, предварительно приняв рекламируемый им препарат. Сначала все шло хорошо. Шесть недель, отведенные для проведения эксперимента, заканчивались, и исследователь уже собирался покинуть госпиталь, когда внезапно заболел бубонной формой чумы, от которой и скончался.
Эксперимент русского врача Данилы Самойловича закончился более успешно. Его коллега окурил ядовитыми порошками белье человека, умершего от чумы. После этой процедуры Самойлович надел белье на голое тело и носил его сутки. Самойлович справедливо считал, что «живое язвенное начало» (то есть, говоря современным языком, возбудитель чумы) должно погибнуть от окуривания. Опыт прошел успешно, Самойлович не заболел. Так наука за сто лет до открытия Иерсена получила косвенное подтверждение того, что возбудителем чумы является живой микроорганизм.
Поиски средств профилактики и лечения чумы продолжались. Первую лечебную противочумную сыворотку приготовил Иерсен. После инъекции сыворотки больным чума протекала в более легкой форме, число смертельных случаев снижалось. До открытия антибактериальных препаратов эта вакцина была главным терапевтическим средством в лечении чумы, но при наиболее тяжелой, легочной, форме заболевания она не помогала.
В 1893-1915 годы питомец Новороссийского университета Владимир Хавкин работал в Индии. В 1896 году в Бомбее он организовал лабораторию, в которой создал первую в мире убитую противочумную вакцину и опробовал ее на себе. Новая вакцина обладала как терапевтическим, так и профилактическим действием. После вакцинации заболеваемость снижалась в два раза, а смертность - в четыре. Прививки вакциной Хавкина получили в Индии широкое распространение. До 40-х годов ХХ столетия вакцина Хавкина оставалась в сущности единственным лекарством от чумы. В 1956 году исполнилось 60 лет с момента создания противочумной лаборатории (с 1925 года - Бактериологический институт имени Хавкина). Президент Индии Прасад в связи с этим отметил: «Мы в Индии премного обязаны доктору Владимиру Хавкину. Он помог Индии избавиться от эпидемий чумы и холеры».
В нашей стране разработка живых вакцин против чумы началась в 1934 году с получения в Ставропольском научно-исследовательском противочумном институте М.П. Покровской нового вакцинного штамма путем обработки культуры возбудителя чумы бактериофагами. После проверки вакцины на животных Покровская с сотрудником ввели себе подкожно по 500 миллионов микробов этой ослабленной культуры чумной палочки. Организм экспериментаторов резко среагировал на введение «инородных» микроорганизмом подъемом температуры, ухудшением общего состояния, проявлением реакции на месте введения. Однако через трое суток все симптомы болезни исчезли. Получив, таким образом, «путевку в жизнь», вакцина стала успешно применяться при ликвидации вспышки чумы в Монголии.
В это же время на островах Ява и Мадагаскар французские ученые Л. Оттен и Г. Жирар тоже вели работы по созданию живой вакцины. Жирару удалось выделить штамм чумного микроба, который спонтанно потерял вирулентность, то есть перестал быть опасным для человека. Вакцину на основе этого штамма ученый назвал инициалами погибшей на Мадагаскаре девочки, у которой он был выделен, - EV. Вакцина оказалась безвредной и высоко иммуногенной, поэтому штамм ЕV и по сей день используется для приготовления живой противочумной вакцины.
Новую вакцину против чумы создал научный сотрудник Иркутского научно-исследовательского противочумного института Сибири и Дальнего Востока В.П. Смирнов, участвовавший в ликвидации 24 локальных вспышек чумы за пределами нашей страны. На основании многочисленных опытов на лабораторных животных он подтвердил способность микроба чумы вызывать легочную форму болезни при заражении через конъюнктиву глаза. Эти эксперименты легли в основу разработки конъюнктивального и комбинированного (подкожно-конъюнктивального) методов вакцинации против чумы. Чтобы убедиться в эффективности предложенного им метода, Смирнов сделал себе инъекцию новой вакцины и одновременно инфицировал себя вирулентным штаммом наиболее опасной, легочной, формы чумы. Для чистоты эксперимента ученый категорически отказался от лечения. На 16-й день после самозаражения он покинул изолятор. По заключению врачебной комиссии Смирнов перенес кожно-бубонную форму чумы. Эксперты констатировали, что предложенные В.П. Смирновым методы вакцинации оказались эффективными. Впоследствии в Монгольской Народной Республике при ликвидации вспышки чумы этими методами было привито 115 333 человека, из которых заболели лишь двое.