Для работы необходимо иметь чистые и обезжиренные предметные и покровные стекла. Новые стекла кипятят 15-20 мин в 2-5% растворе соды или мыльной воде, споласкивают водой и помещают в слабую хлороводородную кислоту, затем тщательно промывают водой.
Стекла, бывшие в употреблении и загрязненные красителями или иммерсионным маслом, можно обработать двумя способами: 1) погрузить на 2 ч в концентрированную серную кислоту или хромовую смесь, а затем тщательно промыть; 2) кипятить 30-40 мин в 5% растворе соды или щелочи. Необработанные стекла можно обезжирить, натерев их мылом, а затем очистить от него сухой тканью.
Внимание! Если стекло хорошо обезжирено, то капля воды растекается на нем равномерно, не распадаясь на мелкие капли.
Хранят стекла в сосудах с притертыми пробками в смеси Никифорова (равные объемы спирта и эфира) или в 96% спирте. Из растворов стекла извлекают пинцетом.
Внимание! При работе стекла держат пальцами за грани.
Материал для исследования наносят на предметное стекло бактериальной петлей, иглой или пастеровской пипеткой. Чаще всего применяют бактериальную петлю (рис. 7), сделанную из платиновой или нихромовой нити длиной 5-6 см. Петлю закрепляют в петледержателе или впаивают в стеклянную палочку. Конец проволоки сгибают в виде кольца размером 1×1,5 или 2×3 мкм.
Рис. 7. Игла и петли для посева. 1 - игла; бактериальные петли: 2, 3 - петли приготовлены неправильно; 4 - петля приготовлена правильно
Внимание! Правильно приготовленная петля при погружении в воду и извлечении оттуда сохраняет водную пленку.
Перед приготовлением мазка рабочую часть петли прожигают в пламени горелки в вертикальном положении: сначала саму петлю, а затем металлический стержень. Эту манипуляцию проводят и после окончания посева.
Приготовление мазка из культуры, выращенной на жидкой питательной среде . Обезжиренное предметное стекло прожигают в пламени горелки и охлаждают. На предметное стекло, помещенное на подставку (чашку Петри, штатив), наносят культуру. Пробирку с культурой держат большим и указательным пальцами левой руки. Петлю держат в правой руке. Не выпуская петли, мизинцем правой руки прижимают пробку к ладони и осторожно вынимают ее из пробирки. Движения должны быть плавными и спокойными. Горло пробирки обжигают в пламени горелки. Вводят петлю в пробирку. Охлаждают петлю о стенку пробирки и затем погружают ее в культуру. Вынимают петлю, не касаясь ею стенок пробирки. Закрывают пробку, предварительно проведя ее через пламя горелки. Ставят пробирку в штатив. Петлей наносят культуру на предметное стекло, круговыми движениями равномерно распределяя ее. Затем петлю прожигают в пламени горелки. Мазок оставляют для высыхания.
Внимание! Мазок должен быть равномерно растертым, тонким и небольшим (с двухкопеечную монету).
Приготовление мазка из культуры, выращенной на плотной питательной среде . На подготовленное предметное стекло наносят пастеровской пипеткой или петлей каплю изотонического раствора натрия хлорида (0,9%). Культуру осторожно снимают петлей с агара в пробирке или чашке Петри и эмульгируют в капле на стекле. Приготовленный мазок должен быть равномерным и не густым. При его высыхании на предметном стекле остается слабый налет.
Приготовление мазка из гноя или мокроты . Материал забирают стерильной пипеткой или петлей и наносят на середину предметного стекла. Вторым предметным стеклом покрывают первое так, чтобы свободными остались треть первого и второго стекол. Стекла с усилием раздвигают в стороны. Получают два больших мазка.
Приготовление мазка из крови . Каплю крови наносят на предметное стекло на расстоянии одной трети от левого края. Затем краем специально отшлифованного стекла, наклонив его под углом 45°, прикасаются к капле крови. Прижимая отшлифованное стекло к предметному продвигают его вперед. Правильно приготовленный мазок имеет желтоватый цвет и просвечивает.
Приготовление мазков-отпечатков из внутренних органов трупов и пищевых продуктов твердой консистенции . Поверхность органа или пищевого продукта прижигают раскаленным скальпелем и из этого участка вырезают кусочек материала. Пинцетом осторожно захватывают этот кусочек и поверхностью среза прикасаются к предметному стеклу в двух - трех местах, делая ряд мазков-отпечатков.
Высушивание мазка
Мазок высушивают на воздухе при комнатной температуре. В случае необходимости его можно высушить около пламени горелки, держа стекло в горизонтальном положении за края большим и указательным пальцами мазком вверх.
Внимание! При высокой температуре может произойти нарушение структуры клеток.
Фиксация мазка
Мазки фиксируют после полного высыхания с целью: 1) закрепить микроорганизмы на стекле; 2) обезвредить материал; 3) убитые микроорганизмы лучше воспринимают окраску. Фиксированный мазок называется препаратом.
Способы фиксации. 1. Физический - в пламени горелки: стекло берут пинцетом или большим и указательным пальцами и троекратно проводят через верхнюю часть пламени горелки в течение 6 с.
2. Химический - в жидкости: клеточные элементы в мазках из крови и мазках-отпечатках при действии высоких температур разрушаются, поэтому их обрабатывают одной из фиксирующих жидкостей: а) метиловым спиртом- 5 мин; б) этиловым спиртом - 10 мин; в) смесью Никифорова - 10-15 мин; г) ацетоном - 5 мин; д) парами кислоты и формалина - несколько секунд.
Окраска препаратов
После фиксации приступают к окраске препарата.
Окраску препаратов производят на специально оборудованном столе, покрытом линолеумом, пластиком, стеклом и т. д. На столе необходимы сосуд с дистиллированной водой; подставка из двух трубочек или палочек, соединенных резиновыми трубками с обеих сторон (для размещения препаратов); пинцеты, цилиндры, пипетки, фильтровальная бумага, набор красителей, емкость для их слива. Стол для окраски должен находиться рядом с водопроводным краном.
Отношение микроорганизмов к красителям называется их тинкториальными свойствами. В микробиологии широко используют анилиновые красители. Большинство микроорганизмов лучше воспринимает основные красители.
Наиболее употребительны следующие красители: красные (фуксин основной, фуксин кислый, конго красный, нейтральный красный); синие (метиленовый и толуидиновый); фиолетовые (генциановый, метиловый, кристаллический); коричнево-желтые (везувин, хризоидин); зеленые (бриллиантовый, малахитовый).
Все красители выпускают в виде аморфных или кристаллических порошков. Из них готовят насыщенные спиртовые и феноловые растворы, а затем для работы используют водно-спиртовые или водно-феноловые растворы красителей. Если при окраске используют концентрированные растворы красителей, то препарат предварительно накрывают фильтровальной бумагой, на которую наносят краситель. При этом кусочки красителя остаются на бумаге.
Внимание! Каплю красителя наносят пипеткой так, чтобы он покрыл весь препарат.
Рецепты красителей
1. Насыщенные спиртовые растворы (исходные):
Красителя - 1 г спирта 96% - 10 мл
Смесь помещают в термостат до полного растворения на несколько дней. Взбалтывают ежедневно. Хранят в склянках с притертыми пробками.
2. Карболовый фуксин Циля (для окраски кислотоустойчивых микроорганизмов, спор и капсул):
Насыщенного спиртового раствора основного фуксина - 10 мл раствора карболовой кислоты 5% - 90 мл
Внимание! Карболовую кислоту вливают в краситель, а не наоборот.
Смесь в течение нескольких минут энергично встряхивают, фильтруют и сливают во флакон для хранения.
3. Фуксин Пфейффера (для окраски по Граму и для простого метода окраски):
Фуксина Циля - 1 мл воды дистиллированной - 9 мл
Краситель готовят непосредственно перед применением.
4. Карболовый генциановый фиолетовый (для окраски по Граму):
насыщенного спиртового раствора
генцианового фиолетового - 10 мл
карболовой кислоты 5% - 100 мл
Растворы смешивают и фильтруют через бумажный фильтр.
5. Раствор Люголя (для окраски по Граму и реактив на крахмал):
Йодида калия - 2 г кристаллического йода - 1 г дистиллированной воды - 10 мл
Смесь помещают в бутыль матового стекла, хорошо закупоривают и ставят на сутки в термостат, затем добавляют 300 мл дистиллированной воды.
6. Щелочной раствор метиленового синего Леффлера:
Насыщенного спиртового раствора метиленового синего - 30 мл раствора гидроксида калия 1% - 1 мл дистиллированной воды - 100 мл
7. Бумажки по Синеву (для окраски по Граму):
1% спиртовой раствор кристаллического фиолетового
Полоски фильтровальной бумаги пропитывают раствором и высушивают.
Методы окраски делят на ориентировочные (простые) и дифференциальные (сложные), выявляющие химические и структурные особенности бактериальной клетки.
Задание 1 . Цитологический анализ гнойного экссудата.
Оснащение : предметные стекла, микроскопы; стерильные ватные тампоны; термостат; спирт-ректификат (65 мл); спирт метиловый абсолютный (65 мл); краска Романовского-Гимзы (120 мл); иммерсионное масло (6 мл); подопытные животные с гнойной раной.
Постановка опыта . Цитологическую картину воспалительного экссудата изучают при получении раневых отпечатков по М. П. Покровской и М. С. Макарову. В хирургической клинике заранее подбирают больное животное с раневой поверхностью, покрытой гнойным экссудатом.
Обычным способом, так же как и для гематологических исследований, подготавливают предметные стекла. Во время проведения лабораторных занятий хорошо вымытые и обезжиренные предметные стекла опускают в спирт (96%-ный), затем вынимают, остатки спирта поджигают. После охлаждения стекло готово к использованию для приготовления раневых отпечатков. При большом количестве гноя, покрывающего рану, его удаляют с помощью стерильных влажных ватных тампончиков. После этого поверхность стекла, отступив 1 см от узкого края, прикладывают к воспаленной ткани. Передвигая стекло, последовательно наносят несколько мазков-отпечатков. На стекле остаются тканевые клетки, клетки экссудата и микроорганизмы. При получении мазков не следует проводить стеклом по поверхности раны и тем самым предупреждать возможность повреждения клеточных элементов экссудата. Чтобы не исказить картины взаиморасположения фагоцитов и микроорганизмов, иногда располагающихся гнездами, нужно слегка прикоснуться стеклом к избранному участку раны и тотчас же отнять его в положении, строго перпендикулярном к раневой поверхности. Для полноты характеристики раневого процесса отпечатки лучше делать с разных участков очага повреждения, например от центра к периферии.
Полученные раневые мазки-отпечатки сушат, затем фиксируют в течение 5 мин метиловым спиртом (этиловым спиртом в равной смеси с этиловым эфиром в течение 15 мин). Фиксированные и высушенные в термостате или на воздухе препараты окрашивают по методу Романовского-Гимзы.
При микроскопировании окрашенных мазков-отпечатков обращают внимание на наличие нейтрофилов разной степени зрелости, микро — и макрофагов, фагоцитирующих возбудителей воспалительного процесса. Устанавливают активность фагоцитов в разных участках раны.
По цитограммам раневых отпечатков можно определить активность защитных и регенераторных реакций организма, степень бактериальной обсемененности и патогенности микроорганизмов, инфицирующих рану. Перечисленные факторы обусловливают динамику заживления ран. Обнаружение полиморфно-ядерных нейтрофильных лейкоцитов, активно фагоцитирующих возбудителей инфекционного процесса, свидетельствует о высокой активности фагоцитарной реакции. В более позднем периоде заживления раны хорошим признаком считается выявление большого числа макрофагов - моноцитарных клеток.
Оформление протокола опыта . Записывают методику приготовления мазков-отпечатков. Отмечают результаты цитологического анализа испытуемого экссудата, обсуждают их и делают выводы.
Вопросы для контроля знаний:
1. Воспаление. Определение понятия. 2. Этиологические факторы, вызывающие воспаление. 3. Внешние признаки воспаления и их характеристика. 4. Расстройства кровообращения и микроциркуляции в зоне воспаления. 5. Характеристика нарушений обмена веществ в очаге воспаления. 6. Роль биологически активных веществ в патогенезе воспаления. 7. Классификация воспалений. 8. Виды экссудата. 9. Виды гнойного воспаления. 10. Эмиграция лейкоцитов при воспалении, основные теории, объясняющие это явление. 11. Учение о фагоцитозе. Завершенный и незавершенный фагоцитоз. 12. Свойства экссудата. 13. Классификация воспалений по преобладанию альтерации, экссудации и пролиферации. 14.Воспаление как реакция целостного организма на повреждение. 15. Патогенез воспаления. Характеристика стадий альтерации, экссудации и пролиферации. 16. Исходы воспаления. 17. Биологическая роль воспаления. 18. Особенности течения воспаления у основных видов сельскохозяйственных животных (лошадей, крупного рогатого скота, свиней и птиц).
Библиотека Дерматология Что такое мазок, взятие мазков-отпечатков для исследованийЧто такое мазок, взятие мазков-отпечатков для исследований
Мазки-отпечатки - это метод цитологического исследования, применяемый с диагностической целью. Особенно ценным этот метод может оказаться при диагностике пузырчатки, злокачественных новообразований.
Мазки-отпечатки берут со дна эрозий, язв или свежих пузырей после удаления покрышки. При наличии фибринозного налета или корок на поверхности язв и эрозий, последние удаляют тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором или дистиллированной водой.
На очищенную эрозивно-язвенную поверхность легко прижимают кусочек стерильной резинки, на котором остаются клеточные элементы, в том числе дегенерирующие, эпителиальные и аконтолитические клетки. Материал на кусочке резинки переносят на обезжиренное предметное стекло (по 4-6 отпечатков на каждые 3-4 стекла), фиксируют метиловым спиртом и высушивают при комнатной температуре. Окраска производится по методу Романовского-Гимзы. Препарат исследуется под микроскопом - сначала с малым увеличением, а затем под иммерсией.
Ред. проф. В.С. Маята
«Что такое мазок, взятие мазков-отпечатков для исследований» раздел
Мазок-отпечаток может быть использован для диагностики инфекционных поражений половых органов. Они назначаются при подозрении на специфические или неспецифические инфекции.
Большинство инфекционных процессов мочеполовой системы локализованы в уретре. Поэтому врач берет соскоб из мочеиспускательного канала и проверяет его теми или иными методами ( , ПЦР, бак посев). Но не для всех инфекций основной зоной поражения становится уретра.
Венерические заболевания, при которых входными воротами может быть слизистая оболочка половых органов:
- сифилис;
- генитальный герпес.
Кроме того, при тяжелом течении герпеса с образованием изъязвлений может быть взят мазок-отпечаток. Он позволяет отдифференцировать эту инфекцию от других патологий: аутоиммунных, онкологических и других патологий.
Мазок-отпечаток головки члена
Неспецифические инфекционные процессы тоже могут быть поводом для назначения исследования.
Мазок-отпечаток головки берется при баланите или баланопостите. Это воспаление головки члена и крайней плоти.
Мазок-отпечаток окрашивают и изучают под микроскопом. Таким способом можно обнаружить некоторых патогенов: кокковую флору, кишечную палочку, грибки рода кандида.
При подозрении на герпетическое происхождение баланопостита из образовавшихся везикул могут быть взяты мазки-отпечатки. Их исследуют с целью выявления клеток Тцанка. Это гигантские многоядерные клетки, образующиеся при генитальном герпесе.
Проведение исследования возможно только при везикулярной форме инфекции.
Мазок-отпечаток для цитологического исследования
Цитологическое исследование предполагает определение в клиническом материале атипичных клеток, указывающих на рак. Для этого используется клинический материал, полученный непосредственно из очага онкологического процесса.
Врач может взять мазок-отпечаток с опухоли половых органов или кожи. Он исследуется под микроскопом.
Цель диагностики: морфологическая оценка клеточного состава. Проводится определение количества ядер, размера и формы клеток, ядро-цитоплазматического соотношения и других критериев. Основное показание к проведению цитологического исследования – это подозрение на рак.
Но диагностика также позволяет выявить и другие, неопухолевые патологические процессы.
Подготовка к исследованию мазка отпечатка
Подготовка к взятию мазка зависит от цели диагностики. Если есть подозрение на инфекционные процессы, обычно врач требует не использовать антисептики и антибактериальные препараты. Они могут уменьшить концентрацию возбудителя в клиническом материале, что приведет к ложноотрицательному результату исследования.
Место, откуда будет браться мазок, не следует мыть. Если это необходимо, не нужно использовать мыло и другие средства гигиены.
Непосредственно перед взятием мазка-отпечатка может потребоваться удаление фибринозных налетов, вскрытие везикул или других морфологических элементов кожи. Как изучают мазок-отпечаток на наличие бактерий?
Мазок-отпечаток из половых органов изучают под микроскопом.
На обезжиренное предметное стекло помещается клинический материал. Высушивают его при комнатной температуре.
Фиксация препарата проводится разными методами, например:
- жаром (наименее эффективный метод);
- спиртом с формалином;
- 95% этиловым спиртом;
- метиловым спиртом;
- парами уксусной кислоты и формалина;
- сулемовым спиртом и др.
В разных лабораториях применяются разные методики.
Разработаны специальные растворы для фиксации, представляющие собой смеси нескольких химических соединений. Чем более качественный раствор, тем лучше удается сохранить структуру и расположение всех клеток в мазке, включая бактериальные клетки. После фиксации проводится окрашивание. Для этого используются разные методы, в зависимости от цели исследования.
Окраска бывает ориентировочной и дифференциальной. Среди дифференциальных окрасок чаще окрашивают по Грамму.
Где сдать анализы?
При необходимости проведения исследований обращайтесь в нашу клинику. У нас доступны все современные методы диагностики патологических процессов. Применяются анализы на инфекции и цитологию.
Мазок-отпечаток возьмет опытный специалист с соблюдением всех правил асептики и антисептики, чтобы не занести инфекцию.
Медицинский работник сделает все возможное, чтобы процедура доставила минимум дискомфорта. Анализы будут проведены в кратчайшие сроки. После их выполнения вы получите консультацию опытного дерматолога, венеролога или другого специалиста.
Если вам необходимо безболезненно сдать мазок отпечаток, обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с 15 летним опытом работы.
Мазок-отпечаток
препарат для микроскопии, приготовленный путем прикосновения предметным стеклом к исследуемой ткани или органу с последующим высушиванием, фиксацией и окраской.
1. Малая медицинская энциклопедия. - М.: Медицинская энциклопедия. 1991-96 гг. 2. Первая медицинская помощь. - М.: Большая Российская Энциклопедия. 1994 г. 3. Энциклопедический словарь медицинских терминов. - М.: Советская энциклопедия. - 1982-1984 гг .
Смотреть что такое "Мазок-отпечаток" в других словарях:
Микроскоп препарат (см. Препараты микроскопические), к рый готовят из тканей или реже из бактер роста на плотных средах Для этого из органа вырезают кусочек ткани и ее срезом один или несколько раз прикасаются (!) к предметному стеклу, мазок… … Словарь микробиологии
Препарат для микроскопии, приготовленный путем прикосновения предметным стеклом к исследуемой ткани или органу с последующим высушиванием, фиксацией и окраской … Большой медицинский словарь
Мазок Папаниколау, тест Папаниколау или цитологический мазок (англ. Papanicolaou test, Pap test или Pap smear) тест, с помощью которого можно определить предраковые или раковые клетки во влагалище и шейке матки (см. Злокачественные… … Википедия
Искусственное введение животным лабораторным (см.) иссл. к ры микроорганизмов, токсинов, иссл. материала, в к ром предполагается содержание микробов или их токсинов. В микробиологии З. э. применяют с целью воспроизвести заболевание или его… … Словарь микробиологии
- (гистологическое cytus клетка + греч. logos учение) основано на изучении с помощью микроскопа особенностей строения клеток, клеточного состава органов тканей, жидкостей организма человека и животных в норме и при патологических процессах. Ц. и.… … Медицинская энциклопедия
- (от др. греч. βίος жизнь и ὄψις внешний вид) метод исследования, при котором проводится прижизненный забор клеток или тканей из организма с диагностической целью. Биопсия является обязательным методом подтверждения диагноза при… … Википедия
Биопсия (от Греческого «βίος» жизнь и «όψη» смотрю/внешний вид) это метод исследования, при котором проводится прижизненный забор клеток или тканей из организма и последующее их микроскопическое исследование. Биопсия является обязательным… … Википедия
См. знак, малость, следствие и след простыл, напасть на след, нет следа... Словарь русских синонимов и сходных по смыслу выражений. под. ред. Н. Абрамова, М.: Русские словари, 1999. след отметина, отпечаток, оттиск; отпечаток, печать, отблеск,… … Словарь синонимов
Совокупность способов обнаружения и изучения морфологических и тинкториальных св в бактерий (микробов) в лабораторной к ре, патологическом материале или в пробах из внешней среды с помощью микроскопии. Применяют для установления д за инфекц.… … Словарь микробиологии
Список эпизодов телесериала «Декстер», рассказывающего о вымышленном серийном убийце Декстере Моргане, который работает судебным экспертом по брызгам крови в полиции Майами. Первые шесть сезонов сериала насчитывают 72 эпизода. В России показ… … Википедия
Слово отсебятина в современном русском языке очень употребительно. Оно носит стилистический отпечаток разговорной речи. Его основное значение можно определить так: ни на чем, кроме собственных измышлений, собственной прихоти, не основанное… … История слов