Иммунодиагностика бесплодия методом СКЛ

Диагностика заключается в определении реактивности лимфоцитов матери на антигены партнера методом смешанной культуры лимфоцитов (СКЛ).

СКЛ проводится на 16-22 день МЦ (предварительная запись по тел.: 59-39-57).

Каждый четверг в 13:00 врач акушер – гинеколог (эндокринолог) высшей категории Квашнина Светлана Анатольевна проводит бесплатные консультации по методу СКЛ. (предварительная запись по тел.: 59-39-57).

Показания для проведения диагностики:

Первичное и вторичное бесплодие

Привычное невынашивание беременности

Регрессирующая беременность

Неудачные попытки ЭКО

HLA – совместимость супругов

Результат исследования – в течение 7-10 дней.

Механизм проведения исследования:

Этот тест состоит из набора культур, которые определяют степень распознавания супругами антигенов тканевой совместимости друг друга.

Лимфоцит - центральная клетка иммунной системы. Систему лимфоцитов можно сравнить с государством, где есть начальники и подчиненные, а каждый служащий выполняет специализированную функцию.

Если лимфоцит встречает любые чужеродные для организма объекты (бактерии, вирусы, чужие клетки и т. д.), то развивается иммунный ответ. Если речь идет о чужих тканях или клетках, то степень иммунного ответа будет зависеть от похожести конфигурации антигенов тканевой совместимости (HLA, human leucocyte antigens, или MHC, major histocompatibility complex, (это синонимы) антигенов).

Иммунный ответ выражается в появлении клонов (потомков одной клетки) клеток, строго специализированных к конкретным чужеродным факторам).

Другими словами, если иммунные клетки начинают реагировать на что-то, они начинают делиться. А деление клеток можно оценить по скорости синтеза ДНК. Чем больше синтезируется ДНК - тем сильнее делятся клетки, тем активнее идет развитие иммунного ответа. Степень синтеза ДНК можно определить по включению в культуру клеток радиоактивного нуклеотида тимидина - «кирпичика» ДНК.

На этом принципе основана оценка смешанной культуры лимфоцитов. Технически это делается следующим образом. У супругов берут кровь, из которой выделяют лимфоциты. Эти лимфоциты помещают в благоприятную для деления питательную среду. Если смешать лимфоциты разных людей, они начнут друг на друга реагировать. Однако если просто зарегистрировать активность смешанной культуры разных людей, невозможно понять, как реагирует конкретный человек, потому что «в бой» вступают клетки всех участников смешанной культуры. Для того, чтобы оценить индивидуальную реакцию каждого участника культуры, клетки одного из супругов подвергают воздействию, которое делает невозможным деление клеток. Однако антигенные свойства лимфоцитов при этом сохраняются. В такой культуре вся активность клеток будет связана только с живыми клетками другого супруга. Сравнивая различные комбинации культур живых и инактивированных клеток можно получить важную информацию о степени иммунологической похожести супругов.

Фактически в этом анализе, очень трудоемком, ставится 12 различных культур, а оценка реакции проводится на 3-и и 5-е сутки культуры. Полученные 24 цифры позволяют получить важную информацию о том, как будет реагировать женщина на антигены тканевой совместимости мужа во время беременности.

Дело в том, что сохранение беременности - активный процесс. Так же, как при реакции отторжения, для развития иммунологической толерантности на первом этапе важно адекватное иммунологическое распознавание пришельца. Если это распознавание вялое, или если оно происходит слишком поздно, зародыш атакуется естественными клетками киллерами матери и погибает.

СКЛ позволяет не только оценить состояние иммунологического распознавания лимфоцитов супругов друг другом, но и проконтролировать процесс лечения с помощью иммунизации лимфоцитами, выбрать метод и дозу иммунизации, оценить перспективы применения того или иного способа коррекции. Поэтому при обнаружении «плохой» конфигурации цифр в СКЛ, часто приходится ее повторять уже после лечебных воздействий.

Первые сообщения о смешанной культуре лимфоцитов (СКЛ) появились в 1964 г. в связи с феноменом бластрансформации. Изучение СКЛ основано на том же принципе, что и реакции бласттрансформации лимфоцитов (см. раздел «Реакция бласттрансформации лимфоцитов »). Сила реакции зависит от степени различия между антигенами гистосовместимости. HLA-A, -В-В- и -С-антигены на поверхности лимфоцитов соответствуют HLA-D-антигенам, которые могут быть выявлены только при помощи СКЛ. В то же время DR-антигены (D-related) могут быть обнаружены при помощи антисывороток (см. раздел «Комплементзависимая цитотоксичность. Типирование по HLA-DR.»). Гипотеза о том, что анти-DR-сыворотки позволяют осуществлять тонкое типирование всего локуса D, кажется в настоящее время менее вероятной, чем гипотеза о существовании двух различных локусов.

Хромосома 6 человека с HLA-комплексом и близко расположенными локусами (GLO; PGM 3).

В настоящее время точно установлено существование 12 антигенов DW и 10 антигенов OR. LD - 2 = минорный D-локус, существование которого можно предположить на основании рекомбинационного анализа

Даже для Iа-антигенов человека в настоящее время обсуждается трехлокусная модель, так что термин «DR» не следует более применять в качестве синонима понятия «человеческие молекулы II класса».

Для оценки реактивности (индивидуума) в отношении аллогенного раздражителя готовят так называемую одностороннюю СКЛ, при которой для стимуляции используют инактивированные клетки. Следует заметить, что даже инактивированные стимулирующие клетки (см. ниже) обладают способностью выделять митогенные факторы, а также до некоторой степени усиливать синтез ДНК и биосинтез иммуноглобулинов. Это может стать скрытым источником ошибок. На мышиной модели хорошо изучены взаимодействия, возникающие в ходе аллогенной реакции.

Механизм индукции аллогенной реакции для получения эффекта зависимого от клеток лимфоцитолиза (модификация описана в соответствующей работе)

MF - макрофаг; T lNDH -индуктор хелперных клеток; Т н - Т-хелпер; рТ с - предшественник цитотоксической клетки; Т с - цитотоксическая клетка; треугольник- DR-антиген; прямоугольник - HLA-A/B-антигены

Правда, до настоящего времени остается неясным, какие типы клеток участвуют в пролиферативном ответе. Исследование первичной реакции лимфоцитов на аллогенные клетки используется в следующих случаях:

Проверка СКЛ-реактивности в качестве критерия оценки клеточного иммунитета;

Типирование HLA-D;

Выяснение взаимозависимости между HLA-D-антигенами и предрасположенностью к определенным заболеваниям;

Выбор пары донор - реципиент.

Большое внимание в настоящее время уделяется исследованию роли иммунных механизмов в репродуктивном процессе, поскольку их нарушение приводит к развитию бесплодия и раннему прерыванию беременности. Исследования иммунологических параметров и их взаимосвязи с репродуктивными процессами позволили сделать вывод о необходимости перестройки иммунной системы при подготовке организма матери к беременности, начиная с овуляторного периода, в момент имплантации эмбриона и в ранний период беременности.

Одной из наиболее сложных и трудно диагностируемых причин бесплодия и повторяющихся спонтанных выкидышей являются иммунные дисфункции.

С целью своевременного выявления иммунологическог о бесплодия в лаборатории иммунологии репродукции проводится обследование супружеских пар с использованием следующих методов диагностики:

• исследование уровня пролиферативного ответа лимфоцитов женщины на антигены партнера(в смешанной культуре лимфоцитов)
• определение активности блокирующих факторов в сыворотке крови женщины.
• оценка количественного содержания субпопуляций естественных цитотоксических клеток в периферической крови женщины.
• расширенная иммунограмма
• исследование содержания регуляторных клеток с супрессорной активностью в периферической крови.
• при выявлении клинических и лабораторных признаков иммунологическог о бесплодия пациентам рекомендовано проведение лечебной процедуры – аллоиммунизации лимфоцитами мужа, которая проводится в соответствии с индивидуальным графиком.

Консультация необходима:

• если при отсутствии гинекологических и эндокринных заболеваний при регулярной половой жизни в течении года нет беременностей.
• в случае повторяющихся(более 1раза) спонтанных прерываний беременности (выкидыше).
• при неудачных ЭКО в анамнезе.
• при угрозе прерывания настоящей беременности.

При выявлении нарушений с целью иммунокоррекции нарушений назначается процедура аллоиммунизации лимфоцитами партнера (АИЛ) . Данный метод лечения разрешен к применению Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения (лицензия ФС№2009/179 от 02.07.2009)

Процедура проводится только при наличии у партнера отрицательных результатов анализа на ВИЧ-инфекции, сифилис и вирусные гепатиты (В, С). Осложнения при АИЛ не выявлено. Метод АИЛ обладает выраженным иммунокорригирующим эффектом, повышает эффективность лечения бесплодия, как в естественном цикле, так и при экстракорпоральном оплодотворении (ЭКО). Также назначается при неудачных попытках экстракорпорального оплодотворения.

АИЛ проводится 1 раз в 28-30 дней (в соответствии с менструальным циклом женщины) в 1-ую фазу цикла. Первый курс включает 3 процедуры АИЛ. После 2-ой процедуры пара повторно сдает контрольный анализ. При наличии позитивной динамики третья процедура АИЛ является последней. При отсутствии динамики — доза клеток для иммунизации увеличивается и проводится 2-ой курс, включающий 2 процедуры. После контрольного анализа в некоторых случаях необходимо назначение 3 курса иммунизации с увеличением дозы клеток. После достижения нормативных значений позитивный эффект держится в пределах 6-8 месяцев.

За период с 2003 по 2013гг. в лаборатории клеточной иммунотерапии было проведено около 3000 процедур аллоиммунизации лимфоцитами партнеров. Для данной процедуры из крови партнера выделяются только лимфоциты, которые всегда присутствуют в спермальной жидкости. В других странах* на протяжении 20 лет также проводится процедура аллоиммунизации, которая помогает женщине выносить и родить здорового ребенка.

СКЛ = смешанная культура лимфоцитов = MLC = mixed lymphocyte culture.Этот тест состоит из набора культур, которые определяют степень распознавания супругами антигенов тканевой совместимости друг друга.Лимфоцит - центральная клетка иммунной системы.Что такое СКЛ?И. И. Гузов, к. м. н., гл. врач Центра иммунологии и репродукции СКЛ = смешанная культура лимфоцитов = MLC = mixed lymphocyte culture.Этот тест состоит из набора культур, которые определяют степень распознавания супругами антигенов тканевой совместимости друг друга.Лимфоцит - центральная клетка иммунной системы. Систему лимфоцитов можно сравнить с государством, где есть начальники и подчиненные, а каждый служащий выполняет специализированную функцию.Если лимфоцит встречает любые чужеродные для организма объекты (бактерии, вирусы, чужие клетки и т. д.), то развивается иммунный ответ. Если речь идет о чужих тканях или клетках, то степень иммунного ответа будет зависеть от похожести конфигурации антигенов тканевой совместимости (HLA, human leucocyte antigens, или MHC, major histocompatibility complex, (это синонимы) антигенов).Иммунный ответ выражается в появлении клонов (потомков одной клетки) клеток, строго специализированных к конкретным чужеродным факторам). Другими словами, если иммунные клетки начинают реагировать на что-то, они начинают делиться. А деление клеток можно оценить по скорости синтеза ДНК. Чем больше синтезируется ДНК - тем сильнее делятся клетки, тем активнее идет развитие иммунного ответа. Степень синтеза ДНК можно определить по включению в культуру клеток радиоактивного нуклеотида тимидина - «кирпичика» ДНК. На этом принципе основана оценка смешанной культуры лимфоцитов.Технически это делается следующим образом. У супругов берут кровь, из которой выделяют лимфоциты. Эти лимфоциты помещают в благоприятную для деления питательную среду. Если смешать лимфоциты разных людей, они начнут друг на друга реагировать. Однако если просто зарегистрировать активность смешанной культуры разных людей, невозможно понять, как реагирует конкретный человек, потому что «в бой» вступают клетки всех участников смешанной культуры.Для того, чтобы оценить индивидуальную реакцию каждого участника культуры, клетки одного из супругов подвергают воздействию, которое делает невозможным деление клеток. Однако антигенные свойства лимфоцитов при этом сохраняются. В такой культуре вся активность клеток будет связана только с живыми клетками другого супруга. Сравнивая различные комбинации культур живых и инактивированных клеток можно получить важную информацию о степени иммунологической похожести супругов.Фактически в этом анализе, очень трудоемком, ставится 12 различных культур, а оценка реакции проводится на 3-и и 5-е сутки культуры.Полученные 24 цифры позволяют получить важную информацию о том, как будет реагировать женщина на антигены тканевой совместимости мужа во время беременности.Дело в том, что сохранение беременности - активный процесс. Так же, как при реакции отторжения, для развития иммунологической толерантности на первом этапе важно адекватное иммунологическое распознавание пришельца. Если это распознавание вялое, или если оно происходит слишком поздно, зародыш атакуется естественными клетками киллерами матери и погибает.СКЛ позволяет не только оценить состояние иммунологического распознавания лимфоцитов супругов друг другом, но и проконтролировать процесс лечения с помощью иммунизации лимфоцитами, выбрать метод и дозу иммунизации, оценить перспективы применения того или иного способа коррекции.Поэтому при обнаружении «плохой» конфигурации цифр в СКЛ, часто приходится ее повторять уже после лечебных воздействий.Использование СКЛ, которое было начато в нашем центре с весны 2000 г., позволило значительно улучшить качество лечение пациенток с бесплодием, невынашиванием беременности и неудачными попытками IVF.

СКЛ (смешанная культура лимфоцитов) - это тест, позволяющий определить степень распознавания иммунными системами супругов антигенов тканевой совместимости друг друга.

Один из видов клеток крови, лимфоциты — являются основой иммунной системы. При этом среди клеток лейкоцитов существует некая иерархия, есть главные клетки, есть подчиненные, из которых каждая выполняет свою функцию.

При встрече лимфоцита с любыми чужеродными для организма объектами (клетками другого организма, вирусами, бактериями, и т. д.), то развивается иммунный ответ. Степень силы иммунного ответа будет зависеть от сходства структуры антигенов тканевой совместимости (HLA- антигенов).

Иммунный ответ выражается в появлении клонов-потомков одной клетки, при этом это клетки, строго специализированные к конкретным чужеродным факторам, на которые необходим ответ. Иначе говоря, реакция иммунных клеток на что-то выражается том, что они начинают делиться. Деление клеток можно оценить по скорости синтеза ДНК. Чем больше синтезируется ДНК — тем интенсивнее делятся клетки, тем их больше, тем активнее идет развитие иммунного ответа. Интенсивность образования ДНК можно выявить путем включения в культуру клеток радиоактивного нуклеотида одного из «кирпичиков» ДНК, тимидина. Именно так и производится оценка смешанной культуры лимфоцитов.

Технически это можно сделать так. У обоих супругов берут кровь, из которой выделяют лимфоциты, которые затем помещают в благоприятную для деления питательную среду. При смешении лимфоцитов разных людей, они начинают друг на друга реагировать. Однако если просто зарегистрировать активность образования ДНК в смешанной культуре разных людей, невозможно понять, как реагирует конкретный человек на другого конкретного человека, потому что "воевать" начинают клетки всех тех людей, лимфоциты которых помещены в среду.

Для того, чтобы оценить индивидуальную реакцию, клетки одного из супругов подвергают воздействию, которое делает невозможным их деление. Однако антигенные свойства лимфоцитов при этом сохраняются. В таком случае вся активность клеток в культуре будет связана только с живыми клетками другого супруга. Сравнивая различные комбинации культур живых и лишенных способности активно действовать клеток, можно получить необходимую информацию о степени иммунологического сходства супругов.

Анализ предполагает исследование 12-ти различных культур, оценка реакции в которых проводится на 3-и и 5-е сутки.

В результате получают 24 цифры, дающие информацию о реакции конкретной женщины на антигены тканевой совместимости мужа в процессе имплантации и во время беременности.

Не только иммунное отторжение, но и иммунная защита беременности - активный процесс. Для развития иммунологической толерантности на первом этапе важно правильное иммунологическое распознавание ДНК мужа, содержащихся в зародыше. Если это распознавание вялое, медленное, происходит слишком поздно, тогда зародыш атакуется естественными клетками-киллерами матери и погибает.

Анализ СКЛ позволяет не только оценить состояние иммунологического распознавания лимфоцитов супругов друг другом, но и проконтролировать процесс лечения с помощью иммунизации лимфоцитами, выбрать метод и дозу иммунизации, оценить перспективы применения того или иного способа исправления ситуации. Поэтому после иммунизации анализ на СКЛ приходится повторять.