Описание
Метод определения
Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA), ЦИК C1q-связывающие (IgG)
Исследуемый материал Сыворотка крови
Определение циркулирующих иммунных комплексов, способных активировать комплемент по классическому пути.
Повышенное поступление чужеродных антигенов, снижение толерантности к аутоангигенам, нарушение процессов элиминации иммунных комплексов приводят к повышенному образованию иммунных комплексов. Такие комплексы могут образовываться непосредственно в тканях, когда вызывающий реакцию антиген связан с соответствующими клетками и тканями. Но если антигены растворимы и циркулируют в крови - отмечается повышение концентрации циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), Циркулирующие комплексы, при определенных условиях (там, где кровоток замедлен или происходит фильтрация, а также при снижении их растворимости), могут откладываться на мембранах мелких сосудов и накапливаться в тканях. Накопление иммунных комплексов, их связывание с факторами комплемента и активация системы комплемента ведут к индукции локального воспаления и повреждению тканей органов. Потенциальная патогенность ЦИК может зависеть от природы антигенов и антител, входящих в их состав, размера, скорости образования и выведения, растворимости, способности связывать комплемент.
Повышение уровня ЦИК возможно при аутоиммунных патологиях (например, системная красная волчанка - СКВ, ревматоидный артрит и др.), ряде хронических инфекционных заболеваний, при которых постоянная продукция антигена инфекционным агентом сочетается с иммунным ответом на него, пролиферативных неопластических заболеваниях, аллергических состояниях. Само по себе повышение уровня ЦИК неспецифично для какого-либо отдельного заболевания и не является безусловным свидетельством иммунокомплексной патологии и повреждения тканей, но если такое повышение коррелирует с наблюдаемыми клиническими проявлениями и другими лабораторными сдвигами (например, признаками усиленной активации системы комплемента), можно подозревать клиническую роль данного фактора. При получении положительного результата рекомендуется всегда выполнить повторное исследование через несколько недель для оценки постоянства присутствия иммунных комплексов в циркуляции и, тем самым, их вероятной клинической значимости. Исследования ЦИК в динамике могут быть полезны и в мониторинге клинической активности и эффективности терапии некоторых заболеваний (в т.ч. СКВ).
Существуют разные методы определения ЦИК, основанные на их физико-химических или биологических свойствах. Результаты, получаемые разными методами, не всегда коррелируют друг с другом. Методы твердофазного ИФА, использующие свойство ЦИК связываться с C1q компонентом комплемента, в настоящее время относятся к предпочтительным и наиболее распространенным, поскольку позволяют выявлять потенциально патогенные циркулирующие иммунные комплексы и обладают большей чувствительностью, чем методы ПЭГ-преципитации. Однако, следует учитывать, что исследование ЦИК все же может быть недостаточно чувствительным и специфичным в диагностике болезней, вызываемых иммунными комплексами, и должно дополняться исследованием потенциальных патологических проявлений эффекта ЦИК на функцию органов, а также оценкой активности системы комплемента, в том числе, определением С3 и С4 компонентов комплемента (), количество которых снижается вследствие усиленного потребления при таких состояниях.
Пределы определения: 0,1 Ед/мл - 200 Ед/мл
Литература
- Лапин С.В. Тотолян А.А. Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний/. Издательство «Человек», СПб, 2010.
- Клиническое руководство Тица по лабораторным тестам (ред. Ву А.), М. Лабора, 2013, 1280 с.
- Нефрология. Национальное руководство (гл. ред.Мухин Н.А.).. М., ГЭОТАР-Медиа, 2014,608 с.
- Podolska M.J. et al. Inflammatory etiopathogenesis of systemic lupus erythematosus: an update. Journal of Inflammation Research. 2015, Vol.:8, P. 161—171.
- Материалы фирмы - производителя реагентов.
Подготовка
Накануне проведения исследования необходимо исключить физические нагрузки и курение. Биоматериал следует сдавать утром с 8 до 10 утра натощак. Между последним приёмом пищи и взятием крови должно пройти не менее 8 часов. Можно пить воду.
Показания к назначению
- Аутоиммунные заболевания с увеличением синтеза иммуноглобулинов: СКВ, синдром Шегрена, ревматоидный артрит и другие системные заболевания.
- Иммунокомплексные васкулиты.
- Гломерулонефриты различного генеза.
- Инфекционные процессы.
Интерпретация результатов
Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследовани¤, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.
Единицы измерения в Независимой лаборатории ИНВИТРО: Ед/мл
Референсные значения: < 20 Ед/мл
Интерпретация результатов:
Повышение.
Увеличение концентрации ЦИК возможно при различных системных нарушениях, включая аутоиммунные расстройства, вирусные и бактериальные инфекции, аллергические заболевания, онкологическую патологию. Следует отметить, что примерно 10% практически здоровых людей могут иметь умеренно повышенное содержание ЦИК. Результат лабораторного теста не может служить единственным основанием для постановки диагноза и всегда должен рассматриваться в комплексе с клиническими данными и результатами других исследований.
Одним из механизмов осуществления иммунологического контроля за постоянством внутренней среды организма животных является удаление из него экзо- и эндогенных антигенов путем образования иммунных комплексов (см.
Раздел 3.4).
Иммунные комплексы, состоящие из молекул антигена и антител, связанных с их антигенными детерминантами, являются постоянными компонентами сыворотки крови человека и животных, обеспечивая нормальное течение иммунологических процессов в здоровом организме. Нормальный низкий уровень первичных малоаффинных иммунных комплексов частично формируется естественными антителами, характеризующими состояние гуморального звена иммунной системы здорового организма. Уровень иммунных комплексов может повышаться при внедрении извне или активизации уже имеющихся в организме чужеродных антигенов.
Общий уровень иммунных комплексов в сыворотке крови в постнаталь- ный период изменяется от минимальных значений у новорожденных до определенных показателей у взрослых животных. В частности, у крупного рогатого скота содержание иммунных комплексов в крови достигает нормативных показателей взрослых животных к 18-месячному возрасту (С. И. Логинов, П. Н. Смирнов, А. Н. Трунов, 1999). Содержание иммунных комплексов в крови новорожденных телят ниже, чем у новорожденных детей, у которых иммунные комплексы могут образовываться за счет трансплацентарной миграции из организма матери антител (1ёО). У теленка, как и у большинства новорожденных сельскохозяйственных животных, образование иммунных комплексов вначале происходит преимущественно за счет антител, поступающих в кровь из молозива, а затем за счет аутосинтеза антител, обусловленного постоянной стимуляцией различными антигенами (как пищевыми, так и инфекционными и другими агентами), в том числе нормальной микрофлорой желудочно-кишечного тракта.
Процесс образования иммунных комплексов отражает, с одной стороны, процесс антителообразования в ответ на чужеродные антигены, а с другой - интенсивность удаления антигенов из организма. Этот процесс, являясь нормальным механизмом выведения антигена из организма, в некоторых случаях может быть причиной болезни. Значение иммунных комплексов в патологии животных определяется их свойствами, которые, в свою очередь, зависят от входящих в состав комплекса антигена, антител и их соотношения в составе комплекса.
Уровень циркулирующих иммунных комплексов связан с функциональным состоянием фагоцитарной системы и находится в обратной зависимости от ее поглотительной емкости (С. И. Логинов и др., 1999). В норме большая часть циркулирующих иммунных комплексов удаляется из организма через печень, частично селезенкой. Мезенхимальные клетки почек участвуют в элиминации растворимых иммунных комплексов (при гломерулонефрите) с сохранением крупных нерастворимых иммунных комплексов, которые более сильно связываются с мезенхимальными клетками и отлагаются в мезенхиме без разрушения.
На выведение иммунных комплексов из организмов и повреждающее действие на ткани влияет их размер. Иммунные комплексы с низкой молекулярной массой обычно легко выводятся из организма через почки без предварительной переработки фагоцитами, хотя они могут длительно циркулировать в крови и откладываться субэндотелиаль- но, вызывая дистрофические процессы в сосудистой стенке. Крупные иммунные комплексы сравнительно мало патогенны, в норме они быстро фагоцитируются и элиминируются. Однако иногда процесс фагоцитоза иммунных комплексов приводит к выбросу из фагоцитирующих клеток пептид-гидролаз, повреждающих ткани.
Чаще других в состав иммунных комплексов входят 1уМ и 1§С. Иммунные комплексы крупных размеров, содержащие 1дО, фагоцитируются лучше, чем 1§М-содержащие того же размера. Еще слабее фагоцитируются иммунные комплексы, содержащие 1§А, неспособные взаимодействовать с Рс-рецептора- ми фагоцитов.
Наиболее патогенными являются иммунные комплексы среднего размера, которые формируются при некотором избытке антигена. Время их циркуляции достаточно велико, и при высокой концентрации в крови именно эти комплексы запускают цепь последовательных иммунопатологических процессов (агрегация тромбоцитов; образование микротромбов в капиллярах; привлечение и активация фагоцитов; выброс пептид-гидролаз, гистамина, цитокинов, простагландинов, лейкотриенов и других биологически активных веществ гра- нулоцитами и моноцитами/макрофагами). Это приводит к повышению проницаемости сосудов, развитию воспаления, часто сопровождающегося деструкцией тканевых структур (разрушение коллагена, базальной мембраны, развитие фибринозного некроза стенки сосудов и периваскулярных тканей).
Избыток антигена, при котором формируются наиболее патогенные иммунные комплексы, возможен в результате генетических нарушений в системе 1г-генов, ведущих к недостаточному син
тезу антител и соответственно к формированию комплексов с избытком антигена; к снижению синтеза антител ведет и дефицит Т-хелперов. Избыток антигена может быть и при снижении фагоцитарной функции клеток (гранулоци- тов и моноцитов/макрофагов), в результате чего нарушаются представление и элиминация антигенов. Дисфункция фагоцитов может приводить к длительной циркуляции комплексов в крови, а также к развитию частых инфекционных осложнений у человека и животных с иммунокомплексными заболеваниями.
Повреждающее действие иммунных комплексов обычно начинается после их субэндотелиального отложения и усиливается в случае наличия в составе иммунных комплексов компонентов комплемента в силу их способности привлекать в очаг поражения эффекторы иммунного воспаления. Возможно патогенное действие комплексов и без отложения в тканях за счет освобождения (при участии циркулирующих иммунных комплексов - ЦИК) биологически активных веществ.
Иммунокомплексная патология может проявляться как на местном уровне, так и на системном. Классическим проявлением местной патологии является феномен Артюса, а системной - сывороточная болезнь.
Феномен Артюса может быть воспроизведен путем повторного (через
5 сут) подкожного введения кроликам антигена (сыворотки крови лошади). В месте введения появляется отек, а в последующем - гиперэргическая воспалительная реакция с некрозом. При этом в крови накапливаются антитела. При повторном введении антигена локально формируется большое количество иммунных комплексов, образующихся при взаимодействии введенного антигена с накопившимися антителами, которые и обусловливают местное проявление феномена.
Сывороточная болезнь развивается при повторном внутривенном введении животным высоких доз антигена (гипериммунной сыворотки или сыворотки от реконвалесцентов). На
6- 7-е сутки после введения высоких доз антигена у животного в сыворотке крови начинают накапливаться антитела, которые после повторного введения антигена участвуют в формировании внутрисосудистых иммунных комплексов, в том числе нерастворимых, способных откладываться в различных органах и тканях. Проявлением сывороточной болезни являются общие (лихорадка) и локальные (системные васкули- ты, артриты, нефрит) поражения, зависящие от мест отложения иммунных комплексов.
Наличие иммунных комплексов имеет место при многих заболеваниях, в том числе при инфекционных, бактериальных (стрептококковых, стафилококковых, пневмококковых), вирусных (гепатит В, цитомегаловирусная болезнь новорожденных, алеутская болезнь норок, чума плотоядных, инфекционная анемия лошадей, лейкоз и пара- грипп крупного рогатого скота), паразитарных (малярия, трипаносомоз, лей- шманиоз), почечных (гломерулонефрит, 1§А-нефропатия), идиотипических воспалительных процессах, иногда называемых коллагенозами (системная красная волчанка, ревматоидный артрит, склеродермия), а также при некоторых гематологических, неопластических, кожных, неврологических, эндокринных, желудочно-кишечных заболеваниях.
При атеросклерозе, эндоартериитах иммунные комплексы откладываются на внутренней стенке сосудов, вызывая их диффузное воспаление; при заболеваниях, индуцируемых стрептококковой инфекцией (диффузный гломерулонефрит, хронический ревматизм),- вдоль базальных мембран почечных клубочков, в ткани сердца.
Как известно, для нормального функционирования иммунной системы и организма в целом необходима постоянная антигенная нагрузка за счет небольших доз экзо- и эндоантигенов, вызывающих невысокую, чаще поликлональную активацию иммунной системы с образованием иммунных комплексов, обеспечивающих гомеостаз «равновесности». При многих вышеуказанных заболеваниях содержание иммунных комплексов в крови может быть значительно повышено.
При специфическом иммунном ответе механизм образования ЦИК стереотипен для различных заболеваний (С. И. Логинов и др., 1999). При ин- фекционно-воспалительных процессах наиболее универсальным является гуморальный иммунный ответ, независимо от природы этиологического фактора завершающийся образованием плазматических клеток и синтезом специфических антител. При первичном иммунном ответе вначале повышается уровень 1еМ, достигающий максимума в течение 2 нед, с последующим снижением. Динамика содержания в сыворотке крови 1^0 и 1§А аналогична, но начало их синтеза отсрочено во времени [«переключение» синтеза 1§М на 1^0 и (или) 1§А]. Проявлением иммунологической элиминации антигена, происходящей на всех этапах продукции антител, является образование циркулирующих иммунных комплексов, улавливаемых при их достаточно высоком уровне.
С. И. Логинов и др. (1999) различают четыре фазы развития гуморального иммунного ответа при инфекционно-воспалительных заболеваниях человека и животных (по динамике продукции 1еМ).
В первой фазе происходит увеличение продукции 1§М и отсутствие ярко выраженного образования циркулирующих иммунных комплексов, что совпадает с ранними признаками начала заболевания и развития воспалительного процесса. Подключение в первой фазе продукции 1§С и (или) 1цА расценивается как развитие вторичного иммунного ответа на повторный контакт.
Во второй фазе имеют место максимальный уровень продукции 1ёМ, выраженная продукция 1§С и (или) Г^А, начало образования циркулирующих иммунных комплексов, что соответствует пику воспалительного процесса. Высота уровня 1^0 и (или) 1§А зависит от генетически детерминированной силы иммунного ответа, природы возбудителя, состояния иммунной системы на момент заболевания.
В третьей фазе происходит падение уровня 1§М ниже нормы, наблюдают повышенную или несколько пониженную продукцию 1^0 и (или) 1§А, высокий уровень циркулирующих иммунных комплексов.
В четвертой фазе наблюдается нормативное значение 1§М; продукция 1^0 и (или) 1§А соответствует, как правило, третьей фазе, т. е. возможно снижение ниже нормы. В этот период клинически проявляются признаки завершения воспалительного процесса с последующей нормализацией уровня 1^0 и (или) 1§А и ЦИК.
Последовательная смена фаз продукции иммуноглобулинов и ЦИК имеет место при остром течении воспалительных заболеваний (С. И. Логинов и др., 1999), после завершения которых (т. е. при выздоровлении) наблюдается нормализация показателей гуморального звена иммунной системы.
Фазы гуморального иммунного ответа имеют непосредственную связь с Т-клеточным звеном иммунитета. В первой и второй фазах иммунного ответа усиление продукции антител стимулируется влиянием Т-хелперов на В-лимфоциты с последующим повышением формирования ЦИК (во вторую и третью фазы). В четвертую фазу снижение уровня ЦИК обусловлено усилением Т-супрессии синтеза антител.
С. И. Логинов и др. (1999) у коров с острой и хронической патологией органов размножения (серозный, катаральный, гнойно-катаральный маститы, абсцессы вымени, катарально-гнойные эндометриты) установили четкую зависимость подъема и спада уровней ЦИК от стадии воспалительного процесса, т. е. их взаимосвязь с клиническим течением заболевания: в первой стадии заболевания - нормативное значение ЦИК; в третьей («развернутая стадия» заболевания) - подъем до максимальных значений уровня циркулирующих иммунных комплексов; в четвертой стадии (выздоровление или ремиссия) - снижение до нормативных показателей.
При хроническом течении (гнойно-катаральный мастит, абсцесс вымени) или обострении заболевания после ремиссии возможно развитие пятой стадии, во время которой наблюдается стойкое повышение уровня циркулирующих иммунных комплексов. Клинически пятая стадия проявляется ухудшением общего состояния, снижением упитанности и удоя у коров, лейкоцитозом, в тяжелых случаях возобновляются клинические признаки заболевания.
Таким образом, у животных и человека при острых и хронических инфекционно-воспалительных процессах фазы развития гуморального иммунитета аналогичны и взаимосвязаны с клиническим течением болезни. Выраженное повышение содержания циркулирующих иммунных комплексов в конце острого и особенно в течение хронического заболевания свидетельствует о неблагоприятном прогнозе. Это обусловлено нарушением процесса удаления антигена из организма, его персистенцией в крови и состоянием постоянной активации гуморального звена иммунитета, что ведет к формированию иммунных комплексов и повышению возможности отложения их в тканях с последующим повреждением.
– анализ, направленный на количественное исследование высокомолекулярных соединений, образующихся из специфических иммуноглобулинов и антигенов при их высокой концентрации. Повышенный уровень ЦИК в крови свидетельствует о риске их отложения в тканях и развития воспаления. Анализ выполняется при иммунологическом обследовании, результаты применяются в иммунологии, ревматологии, аллергологии, инфекционистике. Исследование используется для диагностики и мониторинга аллергических, аутоиммунных и хронических инфекционных заболеваний, гломерулонефрита. Биоматериалом является сыворотка венозной крови. Для выполнения анализа применяются иммуноферментные методы. Значения нормы – до 20 Ед/мл. Результаты подготавливаются в течение 3-4 рабочих дней. Всего в Москве нашлось 267 адресов, где можно сделать этот анализ.
Определение циркулирующих иммунных комплексов в крови – анализ, направленный на количественное исследование высокомолекулярных соединений, образующихся из специфических иммуноглобулинов и антигенов при их высокой концентрации. Повышенный уровень ЦИК в крови свидетельствует о риске их отложения в тканях и развития воспаления. Анализ выполняется при иммунологическом обследовании, результаты применяются в иммунологии, ревматологии, аллергологии, инфекционистике. Исследование используется для диагностики и мониторинга аллергических, аутоиммунных и хронических инфекционных заболеваний, гломерулонефрита. Биоматериалом является сыворотка венозной крови. Для выполнения анализа применяются иммуноферментные методы. Значения нормы – до 20 Ед/мл. Результаты подготавливаются в течение 3-4 рабочих дней.
Циркулирующие иммунные комплексы – соединения, которые состоят из специфических иммуноглобулинов , компонентов комплемента и антигена. Они образуются и циркулируют в крови при проникновении в организм чужеродного агента. Крупные ЦИК выводятся через печень и селезенку, остальные захватываются и перевариваются фагоцитами. Если в организм поступает большое количество антигена, уровень ЦИК тоже увеличивается. Фагоциты и органы выведения не справляются со своими функциями в полной мере. Происходит накопление циркулирующих иммунных комплексов в тканях и в органах, они повреждаются, развивается воспаление. Такое состояние называется болезнью иммунных комплексов или гиперчувствительностью III типа. Отложение ЦИК характерно для внутренних стенок сосудов, почечных клубочков, суставов. Клинически оно проявляет себя симптомами васкулита, гломерулонефрита , артрита . Патогенетические механизмы аутоиммунных болезней связаны с отложением в органах и тканях ЦИК.
Показания
Исследование циркулирующих иммунных комплексов применяется для выявления и контроля заболеваний, в основе патогенеза которых лежит механизм гиперчувствительности III типа. Оно показано пациентам с аллергическими и аутоиммунными патологиями, хроническими персистирующими инфекциями, поражением почечных клубочков (гломерулонефритом). Основанием для назначения исследования может послужить наличие суставного синдрома, повреждений хрящевой ткани и сосудистых стенок, нарушение функции почек и/или печени. Иногда анализ выполняется в рамках комплексного иммунологического обследования при беременности, при подготовке к операции, при наличии онкологического заболевания.
Исследование циркулирующих иммунных комплексов является надежным диагностическим инструментом, который выявляет патогенетический механизм заболевания и отражает активность процесса. Его значимость повышается при хронических инфекциях и аутоиммунных патологиях со стертой симптоматикой – показатель считается маркером воспалительного процесса в организме. Однако результат анализа отражает количество ЦИК в крови, а не в тканях, поэтому судить о стадии заболевания нельзя. Еще одним ограничением теста является его невысокая специфичность – повышение показателя происходит при многих заболеваниях, поэтому для постановки диагноза используются данные различных исследований: лабораторных, инструментальных, клинических.
Подготовка к анализу и забор материала
Материалом для анализа на циркулирующие иммунные комплексы является кровь. Ее забор выполняется в утренние часы, до приема пищи. Специальной подготовки к процедуре сдачи крови не требуется. За полчаса рекомендуется отказаться от курения, интенсивных физических нагрузок, избегать эмоционального напряжения. Кровь берется из локтевой вены методом пункции. Доставляется в лабораторию в герметичной пробирке в этот же день.
Концентрация циркулирующих иммунных комплексов определяется в сыворотке венозной крови, поэтому перед исследованием пробирку помещают в центрифугу. Форменные элементы отделяются, остается жидкая часть – плазма. Из нее удаляют факторы свертывания. Полученная сыворотка подвергается процедуре иммуноферментного анализа. В данном случае он основан на способности ЦИК связываться с C1q компонентом комплемента. Образующиеся комплексы увеличивают плотность исследуемого образца, которая измеряется с помощью фотометра. На основе полученных данных рассчитывается уровень ЦИК. Подготовка результатов анализа занимает до 4 рабочих дней.
Нормальные значения
Уровень циркулирующих иммунных комплексов в крови в норме не превышает 20 Ед/мл. Физиологические факторы не влияют на этот показатель, однако примерно у 10% здоровых людей определяется умеренное повышение уровня ЦИК в крови без других признаков заболеваний. Поэтому результат данного анализа всегда интерпретируется в комплексе с клиническими данными и показателями других иммунологических тестов.
Повышение уровня ЦИК
Снижение уровня ЦИК
Снижение уровня циркулирующих иммунных комплексов в крови имеет диагностическое значение при мониторинге заболеваний, причиной в этом случае является положительный ответ на терапию. Например, при инфекции количество ЦИК в крови уменьшается при сокращении количества возбудителей. Низкие показатели анализа при первичном обследовании являются нормой.
Лечение отклонений от нормы
Исследование циркулирующих иммунных комплексов в крови имеет диагностическую значимость в различных областях клинической практики, позволяет определять патогенетический механизм заболеваний, отслеживать их развитие, выявлять скрытые воспалительные процессы. С результатами анализа необходимо обратиться к лечащему врачу (иммунологу, ревматологу , аллергологу, инфекционисту).